新型HDACi N25抗腫瘤作用及其通過抑制HDAC3誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞自噬研究.pdf

1、膠質(zhì)瘤是一種常見且高致死率的原發(fā)性腦腫瘤，在小孩和成人中皆可發(fā)生。膠質(zhì)瘤患者經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)治療后，中位生存期只有13-16個月，并且超過70％的膠質(zhì)瘤患者在確診后的2年內(nèi)死亡。為了提高膠質(zhì)瘤治療的有效性及改善膠質(zhì)瘤患者的存活狀況，開發(fā)出新的安全有效的治療藥物顯得尤為重要。N25（注：N25化學(xué)名：N-(2,5-二甲氧基苯基)-N`-羥基辛二酰胺，專利授權(quán)號：ZL201310087797.9），一種新型的組蛋白去乙?；敢种苿赟AHA的基礎(chǔ)

2、上進行構(gòu)效修飾而獲得。細(xì)胞自噬，又稱Ⅱ型細(xì)胞死亡，是指細(xì)胞將自生胞漿蛋白或細(xì)胞器包裹形成囊泡，并與溶酶體融合形成自噬溶酶體進而降解自身成分的過程。細(xì)胞自噬在腫瘤中發(fā)揮著重要作用，其與腫瘤的關(guān)系十分復(fù)雜，目前尚未完全闡明。為了研究N25的抗腫瘤作用及其誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞自噬的分子機制，進行了系列相關(guān)實驗。
　　首先，使用CCK-8法檢測了N25的體外抗增殖活性，并通過建立裸鼠膠質(zhì)瘤移植模型評價N25的體內(nèi)抗腫瘤作用；然后，通過透射電子顯

3、微鏡觀察了N25是否誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞自噬；此外，隨機收集了20例臨床膠質(zhì)瘤樣本及3例正常腦組織，通過western blot分析了臨床膠質(zhì)瘤樣本中LC3, HDAC3, Tip60等蛋白的表達(dá)情況；最后，用western blot分析了N25對膠質(zhì)瘤細(xì)胞中HDAC3, Tip60, ULK1(Atg1), Beclin-1(Atg6)等蛋白的影響，并檢測了選擇性 HDAC3抑制劑 RGFP966是否誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞自噬。
　　研究結(jié)果

4、顯示， N25的體外抗增殖活性略強于SAHA，通過計算得出N25與SAHA的IC50分別為2.55μM和3.58μM，并且從繪制的生長抑制曲線可以發(fā)現(xiàn)，在相對較低濃度范圍內(nèi)，N25較SAHA能夠更顯著地抑制膠質(zhì)瘤 U87細(xì)胞的生長；在膠質(zhì)瘤移植模型中也發(fā)現(xiàn)， N25具有顯著的體內(nèi)抗腫瘤活性且略強于SAHA，其中，N25高劑量組（96 mg/kg）對膠質(zhì)瘤移植模型的抑瘤率約為68%。在透射電子顯微鏡的觀察中，發(fā)現(xiàn)N25（5μM）可以明顯誘

5、導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞自噬體的產(chǎn)生。在對臨床膠質(zhì)瘤樣本的分析中發(fā)現(xiàn)，與正常腦組織相比，HDAC3是明顯上調(diào)的，而LC3與Tip60是明顯下調(diào)的。用N25處理膠質(zhì)瘤細(xì)胞后，發(fā)現(xiàn)HDAC3明顯受到抑制，而LC3與Tip60明顯增加。
　　此外，也發(fā)現(xiàn)N25明顯誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中ULK1(Atg1), Beclin-1(Atg6)等自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)，并且發(fā)現(xiàn)選擇性HDAC3抑制劑RGFP966也可明顯誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞自噬。總之，這些數(shù)據(jù)表明 N25