膠質(zhì)瘤微環(huán)境中SR-A1配體的抗腫瘤作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、腦膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)病率最高的原發(fā)性腫瘤之一，其具有復(fù)發(fā)率高，致死性強(qiáng)等特性。導(dǎo)致膠質(zhì)瘤患者高致死性和高復(fù)發(fā)率一個(gè)主要的原因是間質(zhì)細(xì)胞的大量浸潤。眾多研究表明，腫瘤微環(huán)境在腫瘤細(xì)胞發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，巨噬細(xì)胞作為膠質(zhì)瘤微環(huán)境的重要組成部分，可以促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長、存活、增殖、遷移、侵襲以及新生血管的形成，從而發(fā)揮調(diào)控膠質(zhì)瘤進(jìn)程的作用。
　　A類清道夫受體(SR-A1)是主要表達(dá)于巨噬細(xì)胞的一類重要模式識(shí)別受體，參與

2、調(diào)控巨噬細(xì)胞遷移募集、炎癥因子分泌等多種生物學(xué)功能。前期研究發(fā)現(xiàn)，SR-A1基因缺失可促進(jìn)巨噬細(xì)胞表型向M2型分化增多，從而加快腫瘤微血管新生及膠質(zhì)瘤生長，但SR-A1調(diào)控巨噬細(xì)胞的機(jī)制尚不完全清楚。在此基礎(chǔ)上，本研究利用基因敲除小鼠模型及細(xì)胞水平實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步明確SR-A1配體HSP70以及Fucoidan在膠質(zhì)瘤過程中的作用，并初步探究了其中分子機(jī)制。
　　首先，本研究中我們通過小鼠膠質(zhì)瘤模型發(fā)現(xiàn)HSP70可充分誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞抗腫

3、瘤反應(yīng)。研究結(jié)果表明，瘤內(nèi)注射HSP70能夠顯著抑制小鼠膠質(zhì)瘤進(jìn)程。同時(shí)，通過免疫熒光發(fā)現(xiàn)，在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，HSP70既可來源于腫瘤微環(huán)境，也可以由膠質(zhì)瘤細(xì)胞表達(dá)。因此，進(jìn)一步通過病毒轉(zhuǎn)染的方法在膠質(zhì)瘤細(xì)胞上過表達(dá)HSP70對(duì)其抗腫瘤作用進(jìn)行了驗(yàn)證，小鼠膠質(zhì)瘤模型結(jié)果表明，過表達(dá)HSP70后，其腫瘤進(jìn)程明顯抑制。并且，在人群研究中發(fā)現(xiàn)，HSP70的表達(dá)水平在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中明顯增高，且與膠質(zhì)瘤惡性程度密切相關(guān)，提示HSP70表達(dá)水平具有

4、臨床診斷意義。進(jìn)一步，在體外研究中，發(fā)現(xiàn)HSP70分別刺激野生型（SR-A1+/+）及SR-A1基因敲除（SR-A1-/-）巨噬細(xì)胞后，WT巨噬細(xì)胞與SR-A1 KO巨噬細(xì)胞相比，M1型極化明顯增加，TAM分化明顯減少，提示HSP70通過巨噬細(xì)胞實(shí)現(xiàn)抑制腫瘤生長的作用依賴于SR-A1的參與。其次，通過HSP70與WT和SR-A1-/-巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn)，HSP70能夠通過SR-A1抑制STAT3的磷酸化水平，調(diào)控微環(huán)境中巨噬細(xì)胞

5、M2型極化減少，M1型極化增加，IL-6和TNF-α等細(xì)胞因子表達(dá)水平增加。HSP70能夠激活巨噬細(xì)胞上的SR-A1，抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞中caspase-3的磷酸化水平，誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡。
　　另一方面，發(fā)現(xiàn)腹腔注射Fucoidan后小鼠的膠質(zhì)瘤進(jìn)程出現(xiàn)明顯抑制，而在SR-A1-/-小鼠中腹腔注射Fucoidan則無此效果，進(jìn)一步證實(shí)了SR-A1配體的抗腫瘤作用。同時(shí)體外實(shí)驗(yàn)中，還發(fā)現(xiàn)SR-A1的缺失部分消除了Fucoidan的腫瘤

6、抑制作用。巨噬細(xì)胞經(jīng)Fucoidan處理后，還可以通過激活SR-A1，進(jìn)一步抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的侵襲和遷移能力而在SR-A1-/-的巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)中則未發(fā)現(xiàn)這一作用。上述結(jié)果表明諸如HSP70或Fucoidan等A類清道夫受體的配體物質(zhì)能夠通過改變巨噬細(xì)胞功能和炎癥相關(guān)的腫瘤微環(huán)境，從而顯著限制膠質(zhì)瘤的發(fā)展進(jìn)程。HSP70或Fucoidan能通過增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的識(shí)別和清除腫瘤細(xì)胞的調(diào)節(jié)性免疫反應(yīng)，減緩膠質(zhì)瘤進(jìn)程。這就使得通過SR-A1的特異性