大豆異黃酮對(duì)F1雄鼠生殖發(fā)育和睪酮合成酶功能的影響.pdf

1、目的：研究在雌性大鼠孕期和體外培養(yǎng)睪丸間質(zhì)細(xì)胞（Leydigcell）中，大豆異黃酮（SIF）暴露對(duì)雄性子代生殖發(fā)育可能造成的影響和對(duì)Leydig細(xì)胞中膽固醇側(cè)鏈裂解酶（P450scc）、3β-羥類固醇脫氫酶（3β-HSD）基因表達(dá)及睪酮（T）分泌的影響。方法：實(shí)驗(yàn)分兩部分進(jìn)行。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分：SD大鼠按雌雄2：1同籠交配獲取40只孕鼠。將孕鼠隨機(jī)分為5組：0mg/kg（對(duì)照組）和25mg/kg、50mg/kg、150mg/kg、450m

2、g/kgSIF暴露組。在母鼠孕期13-19天將SIF以花生油為溶劑灌胃染毒。F1雄鼠于出生后第18天檢測(cè)其肛殖距、身長、尾長等發(fā)育指標(biāo)，剖殺稱取睪丸、肝臟和腎臟等內(nèi)臟重量，用放免法測(cè)血清中黃體生成素（LH）和睪酮（T）分泌水平，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-PCR）檢測(cè)睪丸組織中膽固醇側(cè)鏈裂解酶（P450scc）、苗勒管抑制物（MIS）和β-雌激素受體（ERβ）的基因表達(dá)水平。細(xì)胞培養(yǎng)部分：建立SD大鼠Leydig細(xì)胞的原代離體培養(yǎng)方法，

3、用3β-HSD染色觀察并鑒定Leydig細(xì)胞。獲得純度>90％的Leydig細(xì)胞后用SIF進(jìn)行染毒，染毒劑量分別為0ng/ml（陰性對(duì)照組）、50ng/ml、250ng/ml、1000ng/mlSIF組和50ng/ml雌二醇組（陽性對(duì)照組），24小時(shí)后，用RT-PCR法檢測(cè)Leydig細(xì)胞中P450scc和3β-HSD的基因表達(dá)情況，同時(shí)用ELISA法測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清中P450scc、3β-HSD酶蛋白含量和上清中T分泌水平變化。結(jié)果：

4、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：在50mg/kg劑量以下時(shí)表現(xiàn)出隨SIF劑量增加促進(jìn)F1雄鼠的生長發(fā)育，高于50mg/kg時(shí)，隨SIF劑量的增加開始表現(xiàn)為抑制F1雄鼠發(fā)育的趨勢(shì)，在450mg/kg時(shí)睪丸系數(shù)和肛殖距等較對(duì)照組有明顯降低（p<0.05）。放免結(jié)果顯示SIF對(duì)血清LH水平無明顯影響，而血清T水平在150mg/kg、450mg/kg卻有明顯的提高（p<0.05）。RT-PCR結(jié)果顯示SIF可以降低ERβ表達(dá)（p<0.01）；對(duì)P450scc

5、表達(dá)無明顯影響；在150mg/kg和450mg/kg時(shí)可以明顯促進(jìn)MIS表達(dá)（p<0.01）。細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與陰性對(duì)照組比較，隨SIF染毒劑量增加，P450scc基因表達(dá)和細(xì)胞培養(yǎng)上清中P450scc酶蛋白量呈現(xiàn)逐步增加趨勢(shì)，而3β-HSD基因表達(dá)和細(xì)胞培養(yǎng)上清中3β-HSD酶蛋白量呈現(xiàn)逐步降低趨勢(shì)，且二者在250ng/ml、1000ng/mlSIF劑量組與陰性對(duì)照組比較差異顯著。細(xì)胞培養(yǎng)上清液中T水平較陰性對(duì)照組有明顯增加（p