二甲雙胍上調(diào)miR-200c抑制乳腺癌細(xì)胞MCF-7、BT549生長、遷移和侵襲及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、背景和目的：
　　近年來，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)治療糖尿病的一線藥物二甲雙胍能夠降低包括乳腺癌在內(nèi)的許多腫瘤的發(fā)生率和死亡率。其抗腫瘤作用涉及多種信號(hào)通路，其中miRNAs起著重要作用，但是其作用的具體機(jī)制有待深入研究。已有研究發(fā)現(xiàn)miR-200c在包括結(jié)直腸癌、膀胱癌等多種腫瘤中作為抑癌基因存在，并且在乳腺癌細(xì)胞系中差異表達(dá)。同時(shí)有研究證明二甲雙胍能夠通過調(diào)控miR-200家族對(duì)小鼠成纖維細(xì)胞瘤和胰腺癌細(xì)胞產(chǎn)生抗腫瘤作用。因此本研究

2、旨在探究二甲雙胍能否通過調(diào)控 miR-200c影響乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)功能并探究其相關(guān)的分子機(jī)制，希望可以為乳腺癌早期發(fā)現(xiàn)和治療提供新的思路。
　　方法：
　　通過從基因芯片數(shù)據(jù)庫(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo)下載基因芯片(GSE1953)，分析miR-200c水平與乳腺癌病人生存期之間的關(guān)系。用熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同乳腺癌細(xì)胞中 miR-200c的表達(dá)量。不同濃度的二甲雙胍作用于乳腺癌細(xì)

3、胞MCF-7和BT549以及用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方式將pre-miR-200c、miR-200c inhibitor、NC轉(zhuǎn)染至乳腺癌細(xì)胞MCF-7。分別用CCK8實(shí)驗(yàn)和平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力的變化，annexin V-APC/PI凋亡檢測(cè)試劑盒和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡能力的變化，劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)和Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移、侵襲能力的變化，熒光定量PCR和western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞miR-200c和相關(guān)蛋白表達(dá)量

4、的變化。
　　結(jié)果：
　　基因芯片數(shù)據(jù)分析顯示miR-200c含量升高與乳腺癌病人的生存期成正相關(guān)，熒光定量PCR顯示miR-200c在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)量是下調(diào)的，其中在ER+上皮表型的MCF-7細(xì)胞含量高于三陰性間質(zhì)表型的BT549細(xì)胞含量。不同濃度的二甲雙胍作用于乳腺癌細(xì)胞MCF-7和BT549后，細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力顯著減低，凋亡率升高，并且具有時(shí)間和濃度依賴性；同時(shí)細(xì)胞中miR-200c含量升高，原癌基因c-M

5、yc,AKT2, Bcl-2含量減低，抑癌基因p53升高。高表達(dá)miR-200c可產(chǎn)生與二甲雙胍作用相似的結(jié)果；而低表達(dá)miR-200c則產(chǎn)生與二甲雙胍作用相反的結(jié)果，并且該結(jié)果可被二甲雙胍逆轉(zhuǎn)。
　　結(jié)論：
　　miR-200c含量與乳腺癌病人生存期成正相關(guān)，并且其在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)量是下調(diào)的，表明其在乳腺癌中可能為抑癌基因。二甲雙胍可上調(diào)miR-200c抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，誘導(dǎo)其凋亡，該作用可能與原癌基因