潛陽育陰顆粒通過抑制炎性反應(yīng)改善高血壓早期腎損害的基礎(chǔ)與臨床研究.pdf

1、一、目的
　　圍繞高血壓早期腎保護(hù)，開展基礎(chǔ)與臨床研究。通過觀察院內(nèi)特色制劑潛陽育陰顆粒作用于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HLVEC)損傷模型，明確該藥能否下調(diào)炎癥因子表達(dá)、減輕腎臟花生四烯酸(AA)代謝紊亂;通過該藥干預(yù)高血壓的臨床研究，證實(shí)該藥是否可以改善高血壓早期腎損害的相關(guān)指標(biāo);通過流行病學(xué)調(diào)查研究，尋找引起高血壓腎損害的危險(xiǎn)因素，為中醫(yī)藥多因素干預(yù)高血壓早期腎損害提供進(jìn)一步的證據(jù)。
　　二、方法及內(nèi)容
　?。ㄒ唬┗A(chǔ)研

2、究
　　潛陽育陰顆粒對HUVEC細(xì)胞損傷模型活性及相關(guān)蛋白表達(dá)的影響:將SD大鼠隨機(jī)分為正常組、纈沙坦膠囊組、潛陽育陰顆粒組、潛陽育陰顆粒聯(lián)合纈沙坦膠囊組，每組8只，灌胃給藥，其中潛陽育陰顆粒，劑量為10 g/kg/d，分2次給藥，纈沙坦膠囊每日1次給藥，劑量為0.027 g/kg/d，連續(xù)給藥7d，制備含藥血清。HUVEC分為5組，除正常組外，其余組均采用AngⅡ作用于對數(shù)生長期的HUVEC建立細(xì)胞損傷模型。造模后，分別給予相應(yīng)

3、含藥血清干預(yù):對照組（10％空白血清培養(yǎng)液）、模型組（10％空白血清培養(yǎng)液）、纈沙坦膠囊組（10％纈沙坦膠囊血清培養(yǎng)液）、潛陽育陰顆粒組（10％潛陽育陰顆粒血清培養(yǎng)液）、潛陽育陰顆粒聯(lián)合纈沙坦膠囊組（10％潛陽育陰顆粒+10％纈沙坦膠囊血清培養(yǎng)液），繼續(xù)培養(yǎng)24 h。觀察:①M(fèi)TT法檢測含藥血清對AngⅡ誘導(dǎo)HUVEC損傷細(xì)胞活性的影響;②熒光顯微鏡觀察含藥血清對AngⅡ誘導(dǎo)HUVEC損傷細(xì)胞形態(tài)的影響;③含藥血清對AngⅡ誘導(dǎo)的HUV

4、EC損傷細(xì)胞活性氧生成的影響;④含藥血清對內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型NF-κB p65的影響;⑤含藥血清對內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型COX-1、COX-2的影響;⑥含藥血清對內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型PGES及PGIS的影響。
　　結(jié)果:①不同藥物的含藥血清干預(yù)后，結(jié)果顯示:與對照組相比，模型組HUVEC細(xì)胞存活率顯著降低(P＜0.01)，給予含藥血清干預(yù)后，各組細(xì)胞存活率與模型組相比顯著升高（P＜0.01），潛陽育陰顆粒與纈沙坦膠囊聯(lián)合用藥組較纈沙坦膠囊組的

5、活細(xì)胞數(shù)目更高(P＜0.01)。③與對照組相比，模型組細(xì)胞活性氧水平顯著升高(P＜0.01)。給予含藥血清后，各給藥組活性氧水平顯著降低(P＜0.01)，且聯(lián)合用藥組對HUVEC損傷細(xì)胞模型的活性氧水平降低最為顯著(P＜0.05)。④模型組細(xì)胞NF-κB p65蛋白表達(dá)的水平顯著升高(P＜0.01);與模型組相比，各給藥組NF-κB p65蛋白表達(dá)水平顯著降低（P＜0.01），聯(lián)合用藥組較纈沙坦膠囊組NF-κB p65蛋白表達(dá)水平降低明

6、顯(P＜0.05)。⑤各組間相比，COX-1蛋白表達(dá)水平無顯著差異(P＞0.05);與對照組相比，模型組細(xì)胞COX-2蛋白表達(dá)的水平顯著升高(P＜0.01);與模型組相比，各給藥組COX-2蛋白表達(dá)水平顯著降低(P＜0.01)，聯(lián)合用藥組COX-2蛋白表達(dá)水平降低更加明顯（P＜0.01）。⑥與模型組相比，各給藥組PGES及PGIS蛋白表達(dá)水平顯著降低（P＜0.01），其中，聯(lián)合用藥組較纈沙坦膠囊組降低PGIS的表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.

7、01)。
　　結(jié)論:①潛陽育陰顆粒含藥血清可以提高AngⅡ誘導(dǎo)HUVEC損傷細(xì)胞的存活率，降低活性氧的水平;②潛陽育陰顆粒可以減少AngⅡ誘導(dǎo)損傷HUVEC細(xì)胞的炎性反應(yīng)，機(jī)制可能與降低NF-κB p65、COX-2炎癥因子的表達(dá)有關(guān)。③潛陽育陰顆粒拮抗AngⅡ誘導(dǎo)損傷HUVEC細(xì)胞的機(jī)制可能與下調(diào)PGES及PGIS蛋白表達(dá)，從而可能減少致炎前列腺素的產(chǎn)生。④潛陽育陰顆粒和纈沙坦膠囊聯(lián)合用藥組保護(hù)HUVEC細(xì)胞損傷模型的作用強(qiáng)于單

8、純纈沙坦膠囊用藥組。
　?。ǘ┡R床研究
　　潛陽育陰顆粒干預(yù)高血壓早期腎損害的臨床研究:選擇符合年齡在35-75歲之間;原發(fā)性2或3級高血壓病;中醫(yī)肝火亢盛證或陰虛陽亢證;eGFR≥60ml/min/1.73m2，尿ACR正常;自愿參加試驗(yàn)并簽署知情同意書的受試者，按照1∶1的比例隨機(jī)分為試驗(yàn)組和對照組，試驗(yàn)組采用潛陽育陰顆粒加西藥標(biāo)準(zhǔn)降壓治療(以ACEI或ARB為基礎(chǔ)治療，可以聯(lián)合CCB)，對照組采用上述單純西藥治療，觀

9、察周期為6個月，觀察指標(biāo)為:兩組用藥前后尿微量白蛋白、尿ACR、eGFR、NGAL、KIM-1、IL-18以及人口學(xué)資料、生命體征、生化指標(biāo)等，采用SPSS20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析兩組間比較，采用兩個獨(dú)立樣本均數(shù)T檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用配對T檢驗(yàn)。
　　結(jié)果:①給藥前試驗(yàn)組與對照組在人口學(xué)特點(diǎn)、生命體征、生化指標(biāo)，尿微量白蛋白、尿ACR、eGFR等數(shù)據(jù)兩組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明兩組基線均衡有可比性。②給藥觀察6個月后，兩組人口學(xué)

10、特點(diǎn)、生命體征、生化指標(biāo)，尿微量白蛋白、尿ACR、eGFR的組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。尿微量白蛋白指標(biāo)的組內(nèi)配對T檢驗(yàn)結(jié)果顯示，試驗(yàn)組(x)±sd為（9.578±25.871）mg/L，P值為0.017，前后比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），對照組的(x)±sd為（9.318±65.629）mg/L，P值為0.352，前后比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。在改善NGAL方面，組間成組T檢驗(yàn)比較結(jié)果顯示，試驗(yàn)組入組前的(x)±sd

11、為（155.961±62.884）ng/ml，對照組入組前(x)±sd為（172.625±88.3733）ng/ml，兩組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，給藥6個月后，試驗(yàn)組(x)±sd為（131.611±46.576）ng/ml，對照組(x)±sd為（158.180±61.502）ng/ml，兩組療后6個月組間比較P值為0.024，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。組內(nèi)配對T檢驗(yàn)結(jié)果，試驗(yàn)組NGAL(x)±sd為（22.5347

12、±56.391）ng/ml，前后比較P值為0.011，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而對照組(x)±sd為（18.1929±79.2146）ng/ml，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。IL-18、K1M-1組間及組內(nèi)比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論:潛陽育陰顆粒干預(yù)6個月后，可以改善高血壓患者早期腎臟損害指標(biāo)NGAL的表達(dá)，同時有降低尿微量白蛋白的趨勢。
　?。ㄈ?流行病學(xué)調(diào)查研究
　　南京社

13、區(qū)人群高血壓腎損害危險(xiǎn)因素調(diào)查研究:納入來源于南京秦淮區(qū)大光路社區(qū)衛(wèi)生中心門診體檢系統(tǒng)導(dǎo)出的2015年1月至2016年12月診斷為高血壓人群及健康人群數(shù)據(jù)，體檢資料完整。采用成組T檢驗(yàn)，以eGFR＜90及≥90ml/min/1.73m2分兩組，分析Height、Weight、HR、SBP、ALT、AST、TBIL、BUN、TC、HDL-C、LDL-C、TG、血WBC、RBC、PLT、Hb，以及合并冠心病、糖尿病之間的差異;以eGFR為因

14、變量，以上述因素為自變量，采用多元線性回歸分析其相關(guān)性。
　　結(jié)果:①共納入符合方案要求的2697例人群數(shù)據(jù)，包括健康人群1309例，高血壓人群1388例，其中，單純高血壓660例，高血壓合并糖尿病297例，合并冠心病124例。②在健康人群或高血壓人群中，以eGFR水平分組，成組T檢驗(yàn)比較結(jié)果顯示:男女之間的eGFR值均有極顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.001)，女性高于男性;eGFR值與BUN、UA之間呈極顯著的負(fù)相關(guān)(P＜0.00

15、1);與SBP呈顯著的負(fù)相關(guān)（P＜0.01）;與TBIL之間呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。在1388例高血壓人群中分析顯示:eGFR與TG之間呈有極顯著的負(fù)相關(guān)(P＜0.001)，合并冠心病患者eGFR下降更為明顯(P＜0.001)。660例單純高血壓人群組分析顯示:eGFR與體重之間呈負(fù)相關(guān)(P＜0.01)。高血壓人群較健康人eGFR相比，呈極顯著的負(fù)相關(guān)(P＜0.001)。③線性多元回歸分析:eGFR與LDL-C、FBG、WBC、PP之