氧化還原體系對RNaseA包含體復(fù)性的影響.pdf

1、在含二硫鍵蛋白質(zhì)復(fù)性的過程中，二硫鍵的正確形成通常是復(fù)性的限速步驟，二硫鍵的錯(cuò)誤形成也是引起蛋白質(zhì)聚集而導(dǎo)致復(fù)性收率低下的重要因?yàn)椤?br>　　 為了開發(fā)輔助含二硫鍵蛋白質(zhì)高效復(fù)性的方法，本研究將兩種具有輔助二硫鍵快速生成功能的小分子4-巰基苯乙酸(ArSH)和己酰胱胺(HCA)組合成為新型的氧化還原系統(tǒng)(ArSH/HCA)，以RNase A為模型蛋白進(jìn)行復(fù)性條件的優(yōu)化，最終將優(yōu)化的條件應(yīng)用于RNase A包含體復(fù)性，并就復(fù)性效果與傳

2、統(tǒng)的氧化還原系統(tǒng)進(jìn)行了比較。
　　 經(jīng)優(yōu)化確定的最佳復(fù)性條件為在pH8.3 Tris-acetate溶液中，內(nèi)含0.4M urea，1 mM EDTA，1 mM ArSH，0.25 mM HCA，可使0.3 mg·mL-1RNase A復(fù)性3 h達(dá)到復(fù)性平衡，最終復(fù)性收率達(dá)到92％。若其它條件相同，以傳統(tǒng)氧化還原體系(1mM GSH/0.25 mM GSSG)輔助相同濃度的RNase A復(fù)性時(shí)，達(dá)到復(fù)性平衡需6 h，最終復(fù)性收率

3、僅為65％。
　　 在上述工作的基礎(chǔ)上，結(jié)合RNase A包含體復(fù)性實(shí)際情況進(jìn)一步對復(fù)性條件進(jìn)行優(yōu)化之后，在pH8.3 Tris-acetate溶液中，內(nèi)含1 M urea，1 mM EDTA，4 mMArSH，0.5 mM HCA的條件下，復(fù)性1 h可使0.3 mg·mL-1RNase A包含體復(fù)性收率達(dá)50％，5h復(fù)性達(dá)到平衡，最終復(fù)性收率約70％。而以GSH/GSSG、GSH/HCA為氧化還原體系復(fù)性RNase A包含體，