長角血蜱唾液腺功能蛋白發(fā)掘與吸血適應機制研究.pdf

1、蜱是一種專性吸血的外寄生節(jié)肢動物，可攜帶并傳播多種病原體，造成人、畜患上疾病甚至死亡，嚴重影響人類健康和畜牧業(yè)發(fā)展。長角血蜱Haemaphysalis longicomis隸屬于硬蜱科Ixodidae血蜱屬Haemaphysalis，該物種分布廣泛，數(shù)量眾多，危害性極大。長角血蜱為完成整個生活史需要吸食大量宿主血液，其中唾液腺作為重要器官，可分泌多種促進吸血和消化的活性分子，幫助長角血蜱完成正常的吸血活動。研究唾液腺不同吸血時期蛋白差異

2、表達對于闡明長角血蜱的唾液腺吸血的分子機制，進而全面揭示長角血蜱的生存適應對策具有重要意義。
　　本實驗利用第二代測序技術對長角血蜱雌蜱饑餓期、交配前吸血期、交配后半飽期和飽血期的四個吸血階段進行轉錄組測序。測序并合并組裝，共產(chǎn)生87825條Unigene，其中長度在1Kb以上的Unigene有13222條，進行功能注釋，共注釋29109條Unigene。利用該轉錄組序列作為數(shù)據(jù)庫，進行長角血蜱唾液腺4個不同吸血時期所有蛋白質(zhì)的定

3、量蛋白質(zhì)組學研究。最終通過基于iTRAQ的定量蛋白質(zhì)組學技術，以長角血蜱4個不同吸血時期的唾液腺蛋白作為研究對象，鑒定到表達差異蛋白3223條，其中具有注釋信息的蛋白3164條，未注釋蛋白59條。利用生物信息學方法對差異表達蛋白進行系統(tǒng)分析，最終發(fā)現(xiàn)了眾多與調(diào)控促進吸血蛋白表達和運輸相關的蛋白，我們挑選了其中一些重要蛋白進行了RNA干擾，例如驅(qū)動蛋白、動力蛋白、網(wǎng)格蛋白、分選蛋白、半乳糖激酶和腺苷酰硫酸激酶，最終發(fā)現(xiàn)驅(qū)動蛋白和動力蛋白被

4、干擾后，雌蜱吸血受到明顯抑制，導致其過早從宿主體表脫落甚至死亡。通過功能分析，我們推測兩種蛋白在長角血蜱吸血功能分子運輸過程中起著重要作用。
　　本論文利用定量蛋白質(zhì)組學方法對長角血蜱不同吸血時期唾液腺蛋白進行研究，并結合研究結果篩選到能明顯影響雌蜱吸血的兩種蛋白——驅(qū)動蛋白和動力蛋白，這兩種蛋白也是首次在長角血蜱中得到報道。實驗結果對于闡明長角血蜱唾液腺生理變化的分子機制以及長角血蜱適應吸血的分子機制具有重要意義，對于通過分子手