葡萄糖濃度對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:子宮內(nèi)膜癌(EC)是最常見的女性惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和病死率逐年升高。肥胖是促使Ⅰ型EC進(jìn)展的高危因素，與EC的高病死率密切相關(guān)。多項(xiàng)研究結(jié)果顯示，細(xì)胞代謝異常和胰腺癌、結(jié)直腸癌和乳腺癌等多種腫瘤的發(fā)病密切相關(guān)，與EC的關(guān)系也日益獲得關(guān)注。糖代謝異常是超重、肥胖和糖尿病的病理特征之一，也是EC發(fā)病的重要危險(xiǎn)因素。但糖代謝異常促進(jìn)EC發(fā)生的作用機(jī)制尚未明了。因此，在本研究中，我們應(yīng)用已建立的EC細(xì)胞系(Ishikawa、HEC-1

2、-B)，觀察在體外不同葡萄糖濃度培養(yǎng)條件下EC細(xì)胞增殖情況及其機(jī)制探討。
　　方法:通過體外培養(yǎng)EC細(xì)胞株Ishikawa和HEC-1-B，用含不同糖濃度（無糖組:0mmol/L、低糖組:2.5mmol/L、正常糖濃度組:5.5mmol/L、高糖組:25.5mmol/L）的DMEM完全培養(yǎng)液處理細(xì)胞，使用CCK-8法來評(píng)價(jià)不同糖濃度對(duì)EC細(xì)胞增殖的影響;使用PI染色法和AnnexinⅤ/PI法檢測(cè)不同糖濃度對(duì)EC細(xì)胞周期和凋亡的影

3、響;使用DCFH-DA熒光探針來測(cè)定不同糖濃度引起的EC細(xì)胞活性氧(ROS)的改變;使用ATP發(fā)光檢測(cè)試劑盒來檢測(cè)不同糖濃度對(duì)EC細(xì)胞產(chǎn)生ATP的影響;通過Western蛋白印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)上述EC細(xì)胞在不同糖濃度干預(yù)下，AMPK和AKT/mTOR/S6信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)變化，以明確在不同的代謝環(huán)境下細(xì)胞代謝的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。
　　結(jié)果:在不同糖濃度條件下培養(yǎng)EC細(xì)胞系Ishikawa和HEC-1-B，發(fā)現(xiàn)2株EC細(xì)胞的增殖均依賴于

4、培養(yǎng)基中的葡萄糖濃度，且呈劑量依賴模式;低糖濃度通過G1期阻滯抑制Ishikawa和HEC-1-B細(xì)胞增殖，高糖濃度抑制細(xì)胞凋亡;低糖濃度改變糖酵解活性，引起Ishikawa和HEC-1-B細(xì)胞ATP生成減少，ROS產(chǎn)生增加;Western蛋白印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在Ishikawa和HEC-1-B細(xì)胞中，低糖增加p-AMPK的表達(dá)，降低p-AKT及p-S6的表達(dá)，證實(shí)糖代謝異常通過調(diào)節(jié)AMPK/mTOR和Akt/mTOR/S6信號(hào)通路促進(jìn)