食管鱗狀細(xì)胞癌USP22和Ku80表達(dá)的基礎(chǔ)研究及相關(guān)臨床意義.pdf

1、研究目的:
　　食管癌(Esophageal Carcinoma)是全世界最常見的惡性腫瘤之一。食管癌高發(fā)區(qū)集中在亞洲、非洲和拉丁美洲等發(fā)展中國家。我國是食管鱗癌(EsophagealSquamous Cell Carcinoma，ESCC)高發(fā)地區(qū)，國外以食管腺癌為主。近年來，隨著食管癌多學(xué)科治療廣泛開展及應(yīng)用，出現(xiàn)了基于食管鱗癌方面的免疫治療如PD-L1的隨機(jī)、平行、多中心3期臨床研究，食管癌診療水平逐步提高，但食管癌高復(fù)發(fā)及

2、高轉(zhuǎn)移率，目前5年總生存率僅20％-30％。由于ESCC的腫瘤異質(zhì)性，淋巴結(jié)狀態(tài)、腫瘤分化、病理分期等傳統(tǒng)預(yù)后因素不能很好預(yù)測食管癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移風(fēng)險，探索腫瘤預(yù)后有效預(yù)測標(biāo)志物亟待解決，以確定高復(fù)發(fā)和高轉(zhuǎn)移食管癌的不同亞組，指導(dǎo)個體化治療策略和優(yōu)化食管癌治療，以利提高食管癌患者的生存期。
　　泛素特異性蛋白酶22(ubiquitin specific peptidase22，USP22)在多種惡性腫瘤中高表達(dá)，與腫瘤復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移密切相

3、關(guān)。Ku80為DNA結(jié)合蛋白，與DNA末端及與DNA損傷雙鏈DNA斷裂(DSBs)相結(jié)合。Ku80與DSBs非同源末端結(jié)合(NHEJ)修復(fù)途徑密切相關(guān)，參與維持染色體端粒穩(wěn)定、細(xì)胞增殖、凋亡及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。本研究通過分析食管癌細(xì)胞株及癌組織USP22和Ku80蛋白表達(dá)狀態(tài)，探討USP22與Ku80表達(dá)相關(guān)性并分析二者間相互調(diào)控對食管鱗癌發(fā)生發(fā)展的作用，評價USP22-Ku80表達(dá)模型作為ESCC患者診斷、預(yù)后及治療分子表型意義，為ESC

4、C診療提供新思路。
　　研究方法:
　　1.USP22和Ku80在食管鱗癌細(xì)胞株中表達(dá)
　　免疫熒光檢測ECA109食管癌細(xì)胞和Ku80（病毒轉(zhuǎn)染后）過表達(dá)ECA109細(xì)胞中USP22和Ku80蛋白表達(dá)狀態(tài)。
　　Western blotting檢測食管鱗癌細(xì)胞系ECA109細(xì)胞和Ku80過表達(dá)ECA109細(xì)胞中USP22和Ku80蛋白表達(dá)水平。
　　2.USP22和Ku80在食管鱗癌患者腫瘤組織中的表達(dá)<

5、br>　　回顧性研究2010年1月到2010年12月山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院胸外科食管癌切除術(shù)有完整隨訪資料80例食管鱗癌患者。男性58例，女性22例。ESCC病理標(biāo)本采用免疫組織化學(xué)染色方法(immunohistochemistry, IHC)檢測腫瘤組織USP22和Ku80蛋白表達(dá)。
　　3.統(tǒng)計分析研究結(jié)果
　　腫瘤患者蛋白表達(dá)水平與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系用x2檢驗(yàn)、Western blotting所測兩組蛋白表達(dá)定量比較應(yīng)

6、用t檢驗(yàn)，術(shù)后生存分析采用Kaplan-Meier和Log-rank檢驗(yàn)分析，連續(xù)型變量采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差描述，二分類變量采用率和百分比描述，采用卡方檢驗(yàn)比較組間是否有統(tǒng)計學(xué)差異，單因素及多因素的變量分析采用COX回歸分析。
　　研究結(jié)果:
　　1.USP22和Ku80在食管癌細(xì)胞株中表達(dá)
　　USP22和Ku80免疫陽性反應(yīng)均呈紅色熒光，且定位于細(xì)胞核，overlap發(fā)現(xiàn)ECA109 Ku80過表達(dá)細(xì)胞中USP22蛋白

7、表達(dá)高于食管癌細(xì)胞系ECA109細(xì)胞系中表達(dá)水平。
　　ECA109 Ku80過表達(dá)細(xì)胞株中，Western blotting蛋白定量其Ku80過表達(dá)同時USP22蛋白表達(dá)明顯高于ECA109細(xì)胞USP22表達(dá)水平(P＜0.05)。
　　2.USP22和Ku80在食管鱗癌患者癌組織中表達(dá)
　　USP22蛋白和Ku80蛋白陽性表達(dá)產(chǎn)物表現(xiàn)為腫瘤細(xì)胞核內(nèi)棕黃色顆粒。80例ESCC患者分USP22陽性51例和陰性29例，Ku

8、80陽性55例和陰性25例。Ku80與USP22均陽性表達(dá)為44例，兩者表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.501，P＜0.001)。USP22高表達(dá)狀態(tài)與腫瘤分化、T分期（P=0.008，P=0.005）顯著相關(guān)， Ku80表達(dá)與腫瘤的分化、T分期顯著相關(guān)（P=0.010，P=0.008）。單因素分析ESCC患者預(yù)后因素，與腫瘤分化、T分期、N分期、臨床分期、USP22及Ku80陽性表達(dá)水平顯著相關(guān)（P=0.001，P=0.023，P=0.005,

9、P=0.009，P＜0.001，P＜0.001）。COX多因素回歸分析:腫瘤分化、USP22陽性表達(dá)和Ku80陽性表達(dá)為患者總生存期(OS)獨(dú)立危險因素。
　　ESCC患者1，3，5年生存率為88.75％，45.00％，20.65％; USP22和Ku80兩者同時表達(dá)1，3，5年生存率為72.71％，18.22％，0;Ku80陽性組生存率低于陰性組（Log-rank x2=21.50，P＜0.001）;USP22陽性組生存率低于陰

10、性組（Log-rank x2=18.65，P＜0.001）;高分化組生存率高于中分化組和低分化組(Log-rank x2=14.94,P＜0.001)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)論:
　　1.USP22和Ku80免疫陽性熒光反應(yīng)均定位于細(xì)胞核，呈紅色熒光，熒光overlap結(jié)果和Western blotting蛋白定量發(fā)現(xiàn)ECA109 Ku80過表達(dá)食管癌細(xì)胞株USP22蛋白表達(dá)高于食管癌ECA109細(xì)胞株中表達(dá)水平，USP22和Ku80

11、蛋白表達(dá)水平顯著相關(guān)。
　　2.USP22和Ku80在人ESCC中高表達(dá)，且兩者表達(dá)水平均與腫瘤組織分化和T分期相關(guān)，二者高表達(dá)呈現(xiàn)相關(guān)性，表達(dá)存在相互調(diào)控。
　　3.腫瘤分化程度，USP22和Ku80的表達(dá)水平均為ESCC患者術(shù)總生存期獨(dú)立危險因素，且兩者表達(dá)具有顯著相關(guān)性。
　　4.USP22-Ku80表達(dá)模型有望成為ESCC診斷、預(yù)后的分子分型及新治療靶點(diǎn)。
　　創(chuàng)新性及意義:
　　1.ESCC細(xì)胞中