舒洛地爾對(duì)白假絲酵母菌生物被膜形成及生長(zhǎng)的作用研究.pdf

1、白假絲酵母菌（Candida albicans）是一種常見的人類致病真菌，據(jù)疾病控制中心(CDC)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，在口腔假絲酵母菌病發(fā)病率中，兒童的發(fā)病率為7％，艾滋病病人為31％，癌癥化療患者為20％;在健康女性中，假絲酵母菌陰道炎也十分常見，臨床表現(xiàn)多呈反復(fù)發(fā)作。由于白假絲酵母菌可以通過形成生物被膜以應(yīng)對(duì)多種復(fù)雜的環(huán)境，傳統(tǒng)的抗真菌藥物難以穿透從而導(dǎo)致白假絲酵母菌難以清除。
　　白假絲酵母菌生物被膜的形成包括四個(gè)階段:粘附期，定

2、植初期，細(xì)胞外基質(zhì)物質(zhì)分泌期，成熟期。生物被膜是白假絲酵母菌重要的毒力因子之一，菌可借此粘附在宿主組織，假體，植入物（如導(dǎo)管，心臟瓣膜等）的表面，以利于白假絲酵母菌的定植。并且，生物被膜還能夠顯著增加白假絲酵母菌對(duì)傳統(tǒng)抗真菌藥物的耐藥性，與浮游細(xì)胞相比，生物被膜形態(tài)的白假絲酵母菌對(duì)唑類藥物的耐藥性升高約1000倍。因此，亟待尋找新的抗真菌藥物來應(yīng)對(duì)白假絲酵母菌感染。
　　舒洛地爾（1-(4-異丙基苯硫基)-2-氨基-辛基丙醇）是一

3、種鈣通道阻滯劑，能夠抗血管痙攣、抗血栓形成。有研究發(fā)現(xiàn)，舒洛地爾在體外能夠抑制白假絲酵母菌的生長(zhǎng);還有研究證實(shí)，舒洛地爾聯(lián)合氟康唑用藥，對(duì)新型隱球菌有抑制作用，而舒洛地爾對(duì)白假絲酵母菌生物被膜的作用，目前未見相關(guān)研究報(bào)道。本研究通過檢測(cè)舒洛地爾對(duì)白假絲酵母菌生物被膜形成及成熟生物被膜的抑制作用來評(píng)估其對(duì)生物被膜相關(guān)的白假絲酵母菌病的治療潛能。
　　目的:
　　研究舒洛地爾對(duì)白假絲酵母菌生物被膜的抑制作用。通過體外實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)舒洛

4、地爾抑制生物被膜的效果及初步探究其抑制白假絲酵母菌生物被膜的作用機(jī)制;通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)舒洛地爾對(duì)白假絲酵母菌陰道炎的治療效果，以期為淺表性白假絲酵母菌生物被膜感染的治療提供新策略。
　　方法:
　　1.運(yùn)用XTT減低法測(cè)定舒洛地爾對(duì)白假絲酵母菌YEM30，臨床分離株LC3浮游細(xì)胞最小抑菌濃度(MIC80)，生物被膜抑制濃度(BIC80)，生物被膜根除濃度(BEC80)。
　　2.通過時(shí)間殺菌曲線檢測(cè)舒洛地爾抑制白假絲酵

5、母菌生物被膜形成、成熟期生物被膜的動(dòng)力學(xué)。
　　3.運(yùn)用掃描電子顯微鏡觀察舒洛地爾對(duì)白假絲酵母菌生物被膜的形態(tài)影響。
　　4.運(yùn)用透射電子顯微鏡觀察舒洛地爾對(duì)白假絲酵母菌生物被膜細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響。
　　5.運(yùn)用倒置顯微鏡觀察舒洛地爾在不同加藥時(shí)間對(duì)白假絲酵母菌生物被膜酵母相-菌絲相形態(tài)轉(zhuǎn)變影響。
　　6.運(yùn)用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)舒洛地爾對(duì)白假絲酵母菌菌絲生長(zhǎng)特異性相關(guān)基因的表達(dá)影響。
　　7.構(gòu)建白假絲

6、酵母菌陰道炎模型，評(píng)價(jià)舒洛地爾在體內(nèi)抗白假絲酵母菌生物被膜效果。
　　結(jié)果:
　　1.舒洛地爾可抑制白假絲酵母菌生物被膜的形成，并可破壞成熟的生物被膜。舒洛地爾對(duì)白假絲酵母菌YEM30，臨床分離株LC3 MIC80為4μg/mL， BIC80為16μg/mL, BEC80為64μg/mL。
　　2.舒洛地爾抑制白假絲酵母菌生物被膜細(xì)胞的代謝活性呈濃度依賴性，隨著作用時(shí)間延長(zhǎng)，濃度越高，抑制效果越好。
　　3.舒洛

7、地爾在體外使白假絲酵母菌生物被膜細(xì)胞皺縮，隨著作用時(shí)間延長(zhǎng)，出芽細(xì)胞脫落，皺縮明顯。
　　4.舒洛地爾在體外能夠破壞白假絲酵母菌生物被膜細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)，使細(xì)胞膜皺縮，細(xì)胞壁斷裂，細(xì)胞內(nèi)電子密度降低，細(xì)胞內(nèi)容物滲出。
　　5.舒洛地爾有效阻止白假絲酵母菌從酵母相向菌絲相轉(zhuǎn)變，舒洛地爾作用時(shí)間點(diǎn)越早，作用越明顯。
　　6.舒洛地爾在體外使白假絲酵母菌菌絲生長(zhǎng)特異性相關(guān)基因HWP1，ALS3，ECE1的表達(dá)下調(diào)。
　　

8、7.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，與對(duì)照組相比，用藥組的菌落數(shù)顯著減少，炎癥減輕，舒洛地爾能有效治療白假絲酵母菌陰道炎。
　　結(jié)論:
　　研究結(jié)果顯示，舒洛地爾在體內(nèi)外均能有效抑制白假絲酵母菌生物被膜。體外實(shí)驗(yàn)表明舒洛地爾不僅能破壞成熟生物被膜的形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)，而且通過下調(diào)菌絲特異性相關(guān)基因HWP1，ALS3，ECE1的表達(dá)，阻斷菌絲相表達(dá)，從而抑制白假絲酵母菌生物被膜的形成。白假絲酵母菌陰道炎動(dòng)物模型的研究表明，用藥組的菌落數(shù)顯著減少，炎