家庭式豬養(yǎng)殖地區(qū)產(chǎn)ESBL大腸埃希菌耐藥性及其向周邊環(huán)境傳播的研究.pdf

1、背景及目的
　　食源性動物中產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(extended-spectrumbeta-lactamases，ESBL)大腸埃希菌向周邊環(huán)境中的傳播已引起廣泛關(guān)注，目前，已有研究大多集中在規(guī)?；B(yǎng)殖場用藥情況以及產(chǎn)ESBL大腸埃希菌耐藥特征及流行趨勢方面。缺少對散養(yǎng)戶，即家庭式飼養(yǎng)模式進(jìn)行的研究。因此，本研究旨在調(diào)查農(nóng)村家庭式豬養(yǎng)殖地區(qū)養(yǎng)殖廢棄物及其周邊環(huán)境中產(chǎn)ESBL大腸埃希菌的流行狀況、藥物敏感性和分子特征，同時探究養(yǎng)殖

2、廢棄物中產(chǎn)ESBL大腸埃希菌向周邊不同環(huán)境中的傳播情況，進(jìn)而為今后控制該地區(qū)抗生素耐藥及耐藥菌的蔓延提供理論依據(jù)。
　　方法
　　本研究于2015年7月19日-24日開展，選取山東省Z市農(nóng)村家庭式豬飼養(yǎng)地區(qū)的12個村，采集養(yǎng)豬廢棄物（豬糞便、廢水和排污口沉積物）及其周邊環(huán)境樣品（土壤及蔬菜、河水、河流沉積物和井水）;通過ESBL篩選性培養(yǎng)基和飛行時間質(zhì)譜儀對產(chǎn)ESBL大腸埃希菌進(jìn)行篩選和鑒定;采用紙片法進(jìn)行ESBL確認(rèn)試驗;

3、參照美國CLSI2016和歐洲藥敏折點標(biāo)準(zhǔn)，采用瓊脂稀釋法對菌株進(jìn)行MIC測定;采用PCR方法檢測blaCTX-M基因，并通過測序進(jìn)行確認(rèn);應(yīng)用多位點序列分型(multilocus sequence typing，MLST)和脈沖場凝膠電泳(pulsed fieldgel electrophoresis，PFGE)的方法進(jìn)行分子分型和同源性分析。
　　結(jié)果
　　1、養(yǎng)殖廢棄物中共檢出產(chǎn)ESBL大腸埃希菌45株，檢出率為47.

4、87％。其中，豬糞便中產(chǎn)ESBL大腸埃希菌檢出率顯著高于廢水和排污口沉積物(P＜0.001)。藥敏結(jié)果顯示，菌株的多重耐藥率達(dá)100％，尤其對頭孢噻肟(97.78％)、四環(huán)素(95.56％)、復(fù)方新諾明(86.67％)和氟苯尼考(80％)等抗菌藥物耐藥程度較高，但所有菌株對美羅培南和替加環(huán)素均不耐藥。此外，共檢出6種CTX-M基因型，主要以blaCTX-M-65（12株）和blaCTX-M-14（11株）為主;同時，檢測到27種ST型別

5、，優(yōu)勢型別為ST10型及其復(fù)合體，占24.44％(11/45)。
　　2、蔬菜中未檢出產(chǎn)ESBL大腸埃希菌。土壤中共檢出4株產(chǎn)ESBL大腸埃希菌，檢出率為16.67％。藥敏結(jié)果顯示，菌株多重耐藥率達(dá)100％，土壤中分離株與養(yǎng)殖廢棄物中分離株耐藥特征總體一致;所攜帶耐藥基因均為CTX-M-9組中的blaCTX-M-65;經(jīng)PFGE分析發(fā)現(xiàn)3株與養(yǎng)殖廢棄物中分離株同源性＞80％，具有親緣關(guān)系。
　　3、河水與河流沉積物中產(chǎn)ESB

6、L大腸埃希菌檢出率（河水:64％，河流沉積物:76.47％）高于井水(23.26％)(P＜0.001)。藥敏結(jié)果顯示，河水與井水中產(chǎn)ESBL大腸埃希菌耐藥情況與養(yǎng)殖廢棄物的結(jié)果基本一致，并且多重耐藥率達(dá)100％。水體環(huán)境中檢出6種CTX-M基因型，以攜帶CTX-M-9組的blaCTX-M-14基因為主;PFGE酶切圖譜顯示大部分菌株表現(xiàn)出唯一的酶切圖譜，無親緣關(guān)系。同時，河水和井水中分別有7株和3株與養(yǎng)殖廢棄物中菌株攜帶相同CTX-M基

7、因或同一CTX-M組群基因同源性＞80％，具有親緣關(guān)系。
　　結(jié)論
　　1、山東省農(nóng)村家庭式豬養(yǎng)殖地區(qū)，除蔬菜以外，產(chǎn)ESBL大腸埃希菌在養(yǎng)殖廢棄物及其周邊土壤和水體環(huán)境中廣泛流行，耐藥形勢嚴(yán)峻，周邊水體和土壤環(huán)境中與養(yǎng)殖廢棄物中菌株的耐藥特征總體一致。
　　2、山東省農(nóng)村家庭式豬養(yǎng)殖地區(qū)，養(yǎng)殖廢棄物及其周邊土壤和水體環(huán)境中產(chǎn)ESBL大腸埃希菌分子分型表現(xiàn)出多樣性，沒有明顯集中進(jìn)化趨勢。
　　3、動物源性耐藥基因