維生素D3對炎癥相關(guān)性結(jié)直腸癌的影響及作用機(jī)制的探究.pdf

1、本文從以下幾部分闡述維生素D3對炎癥相關(guān)性結(jié)直腸癌的影響及作用機(jī)制的探究。
　　第一部分 1，25-二羥維生素D3對結(jié)腸癌細(xì)胞的影響研究
　　目的：探究1，25-二羥維生素D3(1，25(OH)2D3)對SW480結(jié)腸癌細(xì)胞的E-cadherin、PLEKHA7、miR-24、miR-30a、miR-30b和miR-19a的表達(dá)水平的影響，以及SW480細(xì)胞的PLEKHA7是否可以調(diào)控microRNA的表達(dá)水平。
　　

2、方法：給予SW480細(xì)胞100nmol/L1，25(OH)2D3或等量的DMSO干預(yù)48小時，用qRT-PCR和Western blotting檢測E-cadherin、PLEKHA7的mRNA和蛋白表達(dá)水平，以及miR-24、miR-30a、miR-30b和miR-19a的表達(dá)水平。通過轉(zhuǎn)染siPLEKHA7敲降PLEKHA7的表達(dá)，用qRT-PCR檢測miR-24、miR-30a、miR-30b和miR-19a的表達(dá)水平。
　

3、　結(jié)果：(1)100nmol/L1，25(OH)2D3干預(yù)48小時可以上調(diào)SW480細(xì)胞E-cadherin和PLEKHA7蛋白表達(dá)水平;(2)100nmol/L1，25(OH)2D3干預(yù)48小時可以使SW480細(xì)胞的miR-24、miR-30a、miR-30b和miR-19a的表達(dá)水平顯著上升(p＜0.05);(3)在SW480結(jié)腸癌細(xì)胞中，敲降PLEKHA7后miR-24的表達(dá)水平顯著下降(p＜0.05)。
　　結(jié)論：1，25

4、(OH)2D3可以上調(diào)SW480細(xì)胞的E-cadherin、PLEKHA7蛋白表達(dá)水平以及miR-24、miR-30a、miR-30b和miR-19a的表達(dá)水平;8W480細(xì)胞的PLEKHA7參與miR-24表達(dá)水平的調(diào)控。
　　第二部分 維生素D3對炎癥相關(guān)性結(jié)直腸癌小鼠模型的干預(yù)研究
　　目的：探究維生素D3(VitD3)對氧化偶氮甲烷(AOM)聯(lián)合葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘導(dǎo)的小鼠炎癥相關(guān)性結(jié)直腸癌的治療效果及其作用機(jī)制

5、。
　　方法：雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為6組，第1組為空白對照組(Control)，不灌胃。第2-6組建立炎癌模型，其中第2組為模型對照組(Model)，不灌胃;第3組為鹽水對照組(0)，從撤除2.5％DSS后（即W4）開始給予等量生理鹽水灌胃;第4-6組為維生素D低、中、高劑量干預(yù)組，從撤除2.5％DSS后開始分別給予15、30和60IU/g/周的維生素D3（VitD3，商品名：英康利）灌胃。12周末統(tǒng)計小鼠結(jié)直腸成瘤數(shù)(t

6、umor number，TN)和瘤負(fù)荷(tumor load，TL)，進(jìn)行病理組織學(xué)評估，分別采用qRT-PCR和免疫組織化學(xué)染色對比結(jié)腸組織E-cadherin、PLEKHA7的mRNA和蛋白表達(dá)水平，并用qRT-PCR對比miR-24、miR-30a、miR-30b和miR-19a的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：(1)與鹽水對照組(n=9，TN=7.44±0.53，TL=14.61±0.98mm)相比，中（n=9，TN=4.11±0.

7、68，TL=6.94±1.69mm）和高劑量干預(yù)組(n=10，TN=4.40±0.64，TL=8.10±1.95mm)的維生素D3治療可以顯著降低AOM/DSS炎癌小鼠的成瘤數(shù)和瘤負(fù)荷(p＜0.05);(2)免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示VitD3可以提高AOM/DSS炎癌小鼠E-cadherin蛋白在結(jié)直腸上皮細(xì)胞細(xì)胞膜上的表達(dá)水平，中和高劑量干預(yù)組的免疫組織化學(xué)評分(3.89±0.42，3.80±0.39)均顯著高于鹽水對照組(2.44±0.

8、44，p＜0.05);(3)免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示VitD3可以提高AOM/DSS炎癌小鼠PLEKHA7蛋白在結(jié)直腸上皮細(xì)胞細(xì)胞膜上的表達(dá)量，高劑量干預(yù)組PLEKHA7免疫組織化學(xué)評分(4.80±0.29)顯著高于鹽水對照組(3.111±0.31，p＜0.05)，且E-cadherin和PLEKHA7蛋白的免疫組織化學(xué)評分具有相關(guān)性(相關(guān)系數(shù)為0.741，P＜0.0001);(4)模型對照組結(jié)直腸組織miR-19a的表達(dá)水平與正常小鼠相比