白樺脂醇硝酸酯的合成、特征參數(shù)測(cè)定及抗癌活性研究.pdf

1、目的:
　　白樺脂醇(Betulin，BT)是廣泛存在于自然界中的三萜類化合物，具有顯著的生理活性，如抗癌、消炎、抗敗血病、抗瘧疾、抗病毒、抗菌、抗蟲(chóng)等。由于白樺脂醇分子極性極小、水溶性差而導(dǎo)致藥效不明顯。因此，對(duì)白樺脂醇開(kāi)展結(jié)構(gòu)修飾研究，改善其缺陷，意義十分重大。本研究將具有抗腫瘤作用的白樺脂醇與NO供體（有機(jī)硝酸酯）偶聯(lián)，以期兩者的協(xié)同作用提高白樺脂醇抗腫瘤活性。研究中，對(duì)合成的白樺脂醇硝酸酯純度進(jìn)行了檢測(cè)，并考察了各衍生物對(duì)

2、3種人源癌細(xì)胞的體外抗腫瘤活性，測(cè)定了衍生物特征參數(shù)，包括體外NO釋放量在正辛醇-水中的表觀油水分配系數(shù)，為化合物進(jìn)一步體內(nèi)吸收研究提供參考。
　　方法:
　　采用伯醇羥基保護(hù)、親核取代、脫保護(hù)、還原等多步反應(yīng)對(duì)BT的C-3或/和C-28位羥基進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，柱色譜對(duì)各衍生物進(jìn)行純化，綜合利用紅外光譜、核磁共振譜等鑒定衍生物結(jié)構(gòu);高效液相色譜法在210nm波長(zhǎng)處檢測(cè)了各衍生物的純度;格里斯法測(cè)定了各衍生物體外NO釋放;MTT法

3、測(cè)定白樺脂醇硝酸酯類衍生物對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2、人結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29、人乳腺癌細(xì)胞MCF7的體外抗腫瘤活性;搖瓶法和高效液相法測(cè)定了白樺脂醇、3-2'-硝氧丙酰氧白樺脂醇及3-羰基-28-2'-硝氧乙酰氧白樺脂醇在正辛醇-水中的表觀油水分配系數(shù)。
　　結(jié)果:
　　共設(shè)計(jì)合成白樺脂醇硝酸酯類衍生物12個(gè):3-(2-硝氧乙酰氧基)-28-二甲基叔丁基硅氧基白樺脂醇、3-(2-硝氧丙酰氧基)-28-二甲基叔丁基硅氧基白樺脂醇、

4、3-(2-甲基-2-硝氧丙酰氧基)-28-二甲基叔丁基硅氧基白樺脂醇、3-(2-硝氧乙酰氧基)白樺脂醇、3-(2-硝氧丙酰氧基)白樺脂醇、3-羰基-28-2'-硝氧乙酰氧白樺脂醇、3-羰基-28-2'-硝氧丙酰氧白樺脂醇、3-羰基-28-(2-甲基-2-硝氧丙酰氧)白樺脂醇、3-乙酰氧基-28-(2-硝氧乙酰氧基)白樺脂醇、3-乙酰氧基-28-(2-硝氧丙酰氧基)白樺脂醇、3-乙酰氧基-28-(2-甲基-2-硝氧丙酰氧)白樺脂醇、3-羥

5、亞胺基-28-(2-甲基-2-硝氧丙酰氧)白樺脂醇，所有衍生物純度＞98％。體外NO釋放結(jié)果顯示，白樺脂醇硝酸酯衍生物體外迅速釋放NO，在2小時(shí)內(nèi)達(dá)到平穩(wěn)釋放且C28位NO供體修飾更有利于NO的釋放。MTT法結(jié)果說(shuō)明，白樺脂醇硝酸酯衍生物在體外對(duì)不同的腫瘤細(xì)胞株產(chǎn)生選擇性，多數(shù)衍生物對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29的抑制作用稍強(qiáng)。其中，3-2'-硝氧丙酰氧基白樺脂醇、3-羰基-28-2'-硝氧乙酰氧基白樺脂醇對(duì)HT-29的細(xì)胞抑制活性較為突出。

6、白樺脂醇、3-2'-硝氧丙酰氧白樺脂醇及3-羰基-28-2'-硝氧乙酰氧白樺脂醇的logP值分別為-0.259、0.570、0.337，說(shuō)明該兩個(gè)化合物在體內(nèi)透生物膜能力較好，可較好被吸收。
　　結(jié)論:
　　利用羥基保護(hù)可在BT特定位置引入NO供體結(jié)構(gòu)，各白樺脂醇硝酸酯衍生物的NO釋放在體外具有緩釋作用。多數(shù)白樺脂醇硝酸酯衍生物對(duì)人源結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29表現(xiàn)出較好的選擇性，3-2'-硝氧丙酰氧基白樺脂醇、3-羰基-28-2'