犬下頜牽張成骨中與成骨成血管相關(guān)的microRNA初步研究.pdf

1、目的:建立犬下頜骨牽張成骨模型，利用高通量測序技術(shù)對牽張后即刻和固定2周的下頜骨牽張區(qū)骨組織及犬胚胎、新生犬、骨折犬以及正常對照組犬的下頜骨組織進(jìn)行microRNA的全基因組表達(dá)譜測序，獲得microRNA的差異性表達(dá)，預(yù)測差異性microRNA靶基因，并通過KEGG富集分析找到牽張成骨中成骨、成血管作用相關(guān)的因子信號通路。
　　方法:設(shè)立11組實(shí)驗(yàn)組分別為牽張固定0周組(DOI)、牽張固定2周組(DO2)、骨折固定12天（對應(yīng)牽

2、張組間歇期7天及牽張期7天）組(MF1)、骨折固定26天（對應(yīng)牽張組間歇期7天、牽張期7天及固定期14天）組(MF2)、犬30天胚胎組(E1)、犬35胚胎組(E2)、犬50天胚胎組(E3)、新生犬組(NB)、幼犬2周組(P2)、幼犬4周組(P4)、對照組(AC)。每組實(shí)驗(yàn)動物為3只。DOI組和DO2組分別選取3只健康成年中華田園犬，于其右側(cè)下頜骨施行下頜骨牽張成骨術(shù)，間歇期7天后開始以1mm/天速度將右下頜骨向近中方向牽張7天，并于牽張

3、結(jié)束后即刻和固定2周后處死、收集右側(cè)下頜骨牽張區(qū)標(biāo)本。MF1和MF2組同樣選取健康成年中華田園犬各3只，截?cái)嘤覀?cè)下頜骨、骨折間隙為7mm，分別于術(shù)后12天和26天處死、取材納入實(shí)驗(yàn)，固定時(shí)間對應(yīng)牽張各組。E1、E2、E3組分別選取孕30、35、50天犬各3只，確認(rèn)孕期后取各自胚胎納入實(shí)驗(yàn)。NB組選擇3只出生后當(dāng)日新生犬，P2和P4組分別選取同種出生2周、4周的健康幼犬各3只納入實(shí)驗(yàn)組。對照組選取健康成年中華田園犬，處死E1、E2、E3、

4、NB、P2、P4組及AC組，收集右下頜骨標(biāo)本。提取這幾組骨組織microRNA，進(jìn)行高通量microRNA測序檢測。
　　結(jié)果:1）大體觀:實(shí)驗(yàn)犬均成功完成手術(shù)過程及術(shù)后隨訪，傷口愈合良好，無嚴(yán)重并發(fā)癥。DOI、DO2組牽張器與固位釘牢固，未見松動脫落。右下頜骨牽張區(qū)內(nèi)新生骨組織顏色鮮紅，質(zhì)軟，多為纖維組織及類骨質(zhì)，未見明顯硬組織形成。
　　2)從11組樣本中均提取出足量的總RNA，并成功完成了各組高通量microRNA測序

5、，總共檢測到354個(gè)microRNA有表達(dá)。
　　3)在牽張成骨組、胚胎組、新生組與對照組的對比中，共發(fā)現(xiàn)27個(gè)差異表達(dá)microRNA，相對正常對照組均有表達(dá)上調(diào)的共18個(gè)microRNA、均有下調(diào)的共9個(gè)microRNA。其中miR-494的靶基因PTEN，可能為造成牽張過程中成骨速度加快的原因之一。
　　結(jié)論:miR-494在牽張成骨組、胚胎組及新生組表達(dá)而在正常對照組不表達(dá)，提示牽張成骨與胚胎發(fā)育及幼犬快速生長發(fā)育具