TSPO選擇性配體Yl-IPA08的抗焦慮、抗抑郁作用機(jī)制研究.pdf

1、18ku轉(zhuǎn)位蛋白(Translocator protein，TSPO)，曾被稱為外周型苯二氮卓類受體，其在腦內(nèi)主要位于膠質(zhì)細(xì)胞線粒體外膜上，近年來(lái)被認(rèn)為是焦慮癥和抑郁癥治療的潛在新靶標(biāo)。該蛋白的主要功能是介導(dǎo)膽固醇進(jìn)入線粒體內(nèi)膜，經(jīng)過(guò)酶促反應(yīng)合成神經(jīng)類固醇（如四氫孕酮），進(jìn)而通過(guò)作用于GABAA受體調(diào)節(jié)情緒行為。AC-5216是國(guó)際公認(rèn)的TSPO高選擇性配體，但具有不溶于水、生物利用度低等缺陷。YL-IPA08是軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研

2、究所對(duì)AC-5216進(jìn)行結(jié)構(gòu)優(yōu)化合成的新型配體化合物，具有TSPO親和力和選擇性更高、易溶于水，生物利用度高等優(yōu)點(diǎn)。前期已證實(shí)YL-IPA08在嚙齒動(dòng)物實(shí)驗(yàn)上具有顯著的抗焦慮、抗抑郁、抗PTSD作用，且腦內(nèi)TSPO及其介導(dǎo)的四氫孕酮合成釋放介導(dǎo)了上述行為活性。本研究利用斑馬魚行為模型和皮質(zhì)酮(corticosterone，CORT)誘導(dǎo)BV-2膠質(zhì)細(xì)胞系凋亡模型，探討YL-IPA08抗焦慮、抗抑郁作用及其抗細(xì)胞凋亡機(jī)制，對(duì)解析TSPO的

3、靶標(biāo)價(jià)值及其配體藥物作用機(jī)制具有重要意義。
　　采用新魚缸實(shí)驗(yàn)、黑白偏好實(shí)驗(yàn)、鏡像實(shí)驗(yàn)這三個(gè)經(jīng)典的斑馬魚行為模型，連續(xù)進(jìn)行YL-IPA08藥物處理一周于第八天進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè)，探討該藥在斑馬魚模型上的行為學(xué)效應(yīng)。采用高濃度CORT誘導(dǎo)BV-2細(xì)胞凋亡模型，以YL-IPA08和（或）TSPO拮抗劑PK11195預(yù)處理細(xì)胞2h，而后與CORT共處理24h，采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活性，Western蛋白印跡法

4、檢測(cè)TSPO的表達(dá)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)細(xì)胞上清中四氫孕酮的水平。
　　本研究結(jié)果如下:①與正常對(duì)照組相比，新魚缸實(shí)驗(yàn)中，YL-IPA080.012mg·L-1在不影響游動(dòng)距離的情況下能夠增加實(shí)驗(yàn)魚開(kāi)始6min內(nèi)在魚箱中的上下穿梭次數(shù)和在魚箱上半部分的停留時(shí)間(P＜0.05);黑白偏好實(shí)驗(yàn)中，YL-IPA080.012mgL-1能夠降低實(shí)驗(yàn)魚開(kāi)始6min內(nèi)在暗區(qū)的停留時(shí)間百分比（P＜0.05），同時(shí)增加其在明區(qū)的停留

5、時(shí)間百分比(P＜0.05);鏡像實(shí)驗(yàn)中，YL-IPA080.012mg·L-1能夠減少實(shí)驗(yàn)魚首6min在魚箱中央?yún)^(qū)的游動(dòng)距離百分比和停留時(shí)間百分比(P＜0.05)，但不減少進(jìn)入中央?yún)^(qū)的次數(shù);②采用流氏細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測(cè)發(fā)現(xiàn):與溶劑對(duì)照組相比，CORT誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)中，100、200μmol·L-1的CORT能夠有效誘導(dǎo)BV-2細(xì)胞凋亡(P＜0.05，P＜0.01)，且200μmol·L-1時(shí)作用更為顯著;YL-IPA081～100

6、nmol·L-1與陽(yáng)性化合物AC-5216一樣能夠顯著降低CORT處理的BV-2細(xì)胞的凋亡率(P＜0.01)，且具劑量依賴關(guān)系，該作用能夠被TSPO拮抗劑PK11195100nmol·L-1所拮抗(P＜0.05);CCK-8細(xì)胞活性檢測(cè)顯示，YL-IPA08100nmol·L-1能夠顯著升高細(xì)胞活性(P＜0.01)，PK11195100nmol·L-1處理會(huì)拮抗該作用(P＜0.01);Western蛋白印跡法結(jié)果顯示YL-IPA0810

7、0nmol·L-1能夠顯著增加CORT處理的BV-2細(xì)胞TSPO蛋白的表達(dá)(P＜0.05)，同時(shí)ELISA法檢測(cè)顯示YL-IPA08100nmol·L-1顯著升高細(xì)胞培養(yǎng)液中四氫孕酮的水平(P＜0.01)，PK11195100nmol·L-1顯著逆轉(zhuǎn)該現(xiàn)象，降低四氫孕酮的水平(P＜0.05)。
　　以上結(jié)果提示，TSPO選擇性配體YL-IPA08在斑馬魚行為模型上具有抗焦慮、抗抑郁行為作用，并且顯著對(duì)抗高濃度皮質(zhì)酮誘導(dǎo)的BV-2細(xì)