IL-35在結(jié)節(jié)病發(fā)病機(jī)制中的研究.pdf

1、目的:先前研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，Treg/Th17失衡及Treg細(xì)胞免疫抑制功能缺陷是結(jié)節(jié)病發(fā)病的重要原因之一。IL-35作為Treg細(xì)胞免疫抑制功能的執(zhí)行者，通過促進(jìn)Treg細(xì)胞增殖，抑制Th17分化并誘導(dǎo)iTr35細(xì)胞（分泌IL-35的Treg細(xì)胞亞群）生成發(fā)揮免疫抑制作用。推測結(jié)節(jié)病中Treg細(xì)胞的抑制功能缺陷和Treg/Th17失衡可能與IL-35分泌減少或其在細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)途徑異常有關(guān)。因此本研究將在先前研究基礎(chǔ)上明確結(jié)節(jié)病中合成和釋

2、放IL-35的細(xì)胞來源及其表達(dá)情況;探討IL-35在結(jié)節(jié)病的發(fā)病機(jī)制中可能發(fā)揮的生物學(xué)效應(yīng)，此研究旨在探尋結(jié)節(jié)病的發(fā)病機(jī)制和尋找潛在的治療靶點。
　　方法:ELISA檢測結(jié)節(jié)病組(n=98)和正常對照組(n=98)血漿中IL-35的水平，Real-time PCR檢測結(jié)節(jié)病組和正常對照組IL-35兩個亞基EBI3和p35的表達(dá)水平，以及Treg細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的表達(dá)水平。Pearson相關(guān)分析結(jié)節(jié)病患者血漿中IL-35的水平

3、與臨床參數(shù)的相關(guān)性。選取初治結(jié)節(jié)病患者10例，健康對照者10例，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血中Treg細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比例，IL-35在CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、Treg細(xì)胞上的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:結(jié)節(jié)病組血漿中IL-35的水平(43.56±11.77pg/mL)明顯低于正常對照組(55.18±11.53pg/mL)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）。結(jié)節(jié)病治療組(n=57)較未治療組(n=41)血漿中IL-35的水

4、平明顯升高(47.38±12.02pg/mL vs40.82±10.89pg/mL;P=0.0059)，結(jié)節(jié)病患者血漿中IL-35水平與DLCO占預(yù)測值％成正相關(guān)（r=0.76，P＜0.001)，而與其他臨床參數(shù)未發(fā)現(xiàn)明顯相關(guān)性。結(jié)節(jié)病組EBI3和Foxp3基因mRNA的表達(dá)水平均明顯低于正常對照組(分別為P=0.0016，P=0.0391)，而p35基因mRNA的表達(dá)水平在兩組間無明顯差別（P=0.5816），結(jié)節(jié)病組和正常對照組EB

5、I3基因相對表達(dá)量與Foxp3基因相對表達(dá)量均成明顯正相關(guān)（分別為r=0.786，P＜0.001;r=0.730，P＜0.001)，p35與Foxp3基因相對表達(dá)量在結(jié)節(jié)病組成低度正相關(guān)（r=0.383，P=0.037），而在正常對照組兩基因表達(dá)無明顯相關(guān)性（r=0.208，P=0.271）。流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)，10例結(jié)節(jié)病患者外周血中Treg/CD4+T細(xì)胞的平均比例(5.82±0.51％)與健康對照者(5.71±0.90％)相比無顯

6、著差異（P=0.7413），在CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和Treg細(xì)胞中均未發(fā)現(xiàn)表達(dá)IL-35的細(xì)胞。
　　結(jié)論:結(jié)節(jié)病患者血漿中IL-35水平較正常健康者明顯減低，且經(jīng)激素和或免疫抑制劑治療后水平升高，提示IL-35可能參與了結(jié)節(jié)病的炎癥過程，在其發(fā)病過程中具有重要作用。結(jié)節(jié)病患者血漿中IL-35水平與DLCO占預(yù)測值％成正相關(guān)，提示其有可能作為預(yù)測結(jié)節(jié)病肺部病變進(jìn)展的生物學(xué)指標(biāo)。IL-35的一個亞基EBI3和Treg細(xì)胞轉(zhuǎn)

7、錄因子Foxp3的mRNA表達(dá)水平均明顯低于正常對照組，且EBI3、p35基因與Foxp3基因相對表達(dá)量成正相關(guān)，提示結(jié)節(jié)病患者外周血中Treg細(xì)胞數(shù)量的減少可能導(dǎo)致了EBI3、p35基因生成減少，以至于EBI3與p35形成的異源二聚體減少，最終合成IL-35減少。而本研究采用流式細(xì)胞術(shù)檢測人類T淋巴細(xì)胞亞群并未發(fā)現(xiàn)IL-35表達(dá)陽性的細(xì)胞，可能與人T淋巴細(xì)胞亞群中分泌IL-35的細(xì)胞數(shù)量太少有關(guān)，抑或IL-35可能主要由其它細(xì)胞亞群所