HBV cccDNA及HBsAg定量對慢性乙型肝炎患兒抗病毒療效應(yīng)用價值的研究.pdf

1、本研究通過定量檢測肝組織HBV cccDNA及血清HBsAg含量，分析兩者之間及與血清HBV DNA載量、肝細(xì)胞內(nèi)HBsAg和HBcAg表達強度等臨床指標(biāo)的相關(guān)性，探討二者在評價HBeAg陽性的CHB患兒抗病毒療效中的應(yīng)用價值。
　　研究共隨機選取HBeAg陽性CHB患兒63例，留取常規(guī)病理檢剩余石蠟包埋肝組織的同時留取血清樣本。應(yīng)用不降解質(zhì)粒的依賴ATP的DNA聚合酶(PSAD)消化+滾環(huán)擴增(RCA)+跨缺口實時熒光定量PCR

2、方法檢測肝組織HBV cccDNA含量;電化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測血清HBsAg含量及乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物(HBV-M);熒光定量PCR法檢測血清HBV DNA載量及HBV基因型;美國BECKMAN AU5621全自動生化分析儀檢測血清ALT、AST水平。對肝組織進行常規(guī)病理染色，觀察肝組織炎癥活動度(G)和纖維化程度(S);免疫組化法檢測肝細(xì)胞內(nèi)HBsAg和HBcAg表達強度?？共《局委?8周時HBsAg是否發(fā)生血清學(xué)轉(zhuǎn)換作為抗病毒療

3、效的判定標(biāo)準(zhǔn)，t檢驗和卡方檢驗進行單因素分析;Logistic回歸方法進行多因素分析;pearson簡單相關(guān)和Spearman等級相關(guān)法分析肝組織HBV cccDNA、血清HBsAg兩者之間及與其它臨床檢測指標(biāo)之間的相關(guān)性;受試者工作特征曲線(ROC)評估肝組織HBV cccDNA及血清HBsAg定量對抗病毒療效的預(yù)測價值;配對四格表x2檢驗分析肝組織HBV cccDNA及血清HBsAg定量對抗病毒療效的預(yù)測價值有無差異性。
　　

4、研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，13例患兒接受抗病毒治療48周時發(fā)生了HBsAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換，HBsAg清除率為20.6％。HBsAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換(R)組年齡明顯小于HBsAg未發(fā)生血清學(xué)轉(zhuǎn)換(N-R)組(1.68±0.71vs6.47±3.16，P=0.000)，血清AST(1.85±0.15vs1.98±0.31，P=0.04)、肝組織HBVcccDNA(6.38±0.79vs6.79±0.66,P=0.04)、血清HBsAg(3.48±1.22vs4.

5、14±0.69，P=0.009)及肝細(xì)胞內(nèi)HBsAg表達強度(P=0.012)R組均低于N-R組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義;血清ALT、HBV DNA載量、性別、HBV基因型、肝組織炎癥活動度、纖維化程度及肝細(xì)胞內(nèi)HBcAg表達強度在兩組間分布的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均＞0.05）。多因素分析結(jié)果顯示，血清HBsAg、肝組織HBV cccDNA及年齡三個變量對CHB患兒抗病毒療效的影響有統(tǒng)計學(xué)意義。肝組織HBV cccDNA與血清HBsAg定

6、量(r=0.464，P=0.000)呈正相關(guān)性，二者與HBV DNA載量呈正相關(guān)性(r=0.665，P=0.000;r=0.512，P=0.000)。肝組織HBV cccDNA、血清HBsAg分別與血清ALT、AST、肝組織炎癥活動度、纖維化程度均無相關(guān)性(P均＞0.05）;肝細(xì)胞內(nèi)HBsAg表達強度與肝組織HBVcccDNA定量無相關(guān)性(r=-0.024，P=0.854)，與血清HBsAg定量(r=0.258，P=0.041)呈正相關(guān)

7、性;肝組織HBV cccDNA定量在肝細(xì)胞HBcAg不同表達強度組間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.003)，而血清HBsAg定量在肝細(xì)胞HBcAg不同表達強度組間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.203)。肝組織HBV cccDNA定量以0.08log10copies/cell為最佳臨界值(cut-off)用于預(yù)測抗病毒治療48周時HBsAg發(fā)生血清學(xué)轉(zhuǎn)換的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值(PPV)和陰性預(yù)測值(NPV)分別為92.0％、46.2％、

8、86.8％和60.0％;血清HBsAg定量以3.681og10IU/mL為cut-off預(yù)測抗病毒治療48周時HBsAg發(fā)生血清學(xué)轉(zhuǎn)換的靈敏度、特異度、PPV和NPV分別為86.0％、69.2％、91.2％和56.3％;肝組織HBV cccDNA、血清HBsAg定量對抗病毒療效預(yù)測價值的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.146)。
　　血清HBsAg、肝組織HBV cccDNA及年齡是影響HBeAg陽性的CHB患兒抗病毒療效的主要因素。肝

9、組織HBV cccDNA與血清HBsAg定量呈正相關(guān)性，二者與血清HBV DNA均呈正相關(guān)性，二者結(jié)合血清ALT、AST、肝組織炎癥活動度、纖維化程度臨床檢測指標(biāo)，可全面評價CHB患兒病情變化。肝組織HBV cccDNA與血清HBsAg相比其更能精確反映HBV在肝細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制情況，血清HBsAg反映的HBV感染狀態(tài)，但二者對評估HBeAg陽性的CHB患兒遠(yuǎn)期的抗病毒療效均有較好的預(yù)測價值。因此，對于HBeAg陽性的CHB患兒，血清HBs