全人源抗PD-L1抗體的篩選及其與放療聯(lián)合治療腫瘤的效果和機(jī)制研究.pdf

1、放療作為腫瘤常規(guī)治療雖可在一段時間內(nèi)控制或消退腫瘤，但常常伴隨腫瘤復(fù)發(fā)。近年來研究表明，腫瘤組織中淋巴細(xì)胞浸潤的程度同預(yù)后呈正相關(guān)。放療，尤其是SBRT可以增加免疫細(xì)胞的浸潤，但是同時可能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞表達(dá)一些抑制性的分子，如PD-L1，介導(dǎo)腫瘤組織淋巴細(xì)胞免疫耐受，不能將腫瘤細(xì)胞完全清除。提示放療聯(lián)合PD-L1抗體阻斷PD1/PD-L1抑制信號通路很有可能取得更好的治療效果。本課題擬利用酵母展示技術(shù)篩選全新的人源化PD-L1抗體，并建立

2、小鼠乳腺癌單次大劑量放療模型，研究其聯(lián)合PD-L1抗體阻斷PD1/PD-L1抑制信號通路是否可取得更好的治療效果及其作用機(jī)制。
　　利用酵母展示技術(shù)平臺篩選針對PD-L1抗原的人源化抗體，獲得8個比較理想的酵母抗體序列，通過分子克隆的方式克隆到真核表達(dá)載體，并通過瞬時轉(zhuǎn)染293細(xì)胞分泌表達(dá)，經(jīng)純化后獲得抗體蛋白。蛋白通過流式細(xì)胞術(shù)和Elisa的方式鑒定其是否特異性結(jié)合PD-L1抗原，及其是否具有阻斷PD-1/PD-L1結(jié)合的功能.

3、最終確定2株抗體具有阻斷PD-L1、PD-1結(jié)合的功能，是阻斷性抗體，特異性識別PD-L1抗原，且有一株抗體可以識別小鼠的PD-L1，可用于后續(xù)放療治療腫瘤聯(lián)合免疫治療的研究。體外活性實驗證實其具有激活T細(xì)胞的能力，并具有良好的量效關(guān)系。在小鼠腫瘤模型中證實其抗腫瘤活性，同目前在三期臨床的PD-L1阻斷抗體體內(nèi)抗腫瘤活性相當(dāng)。本研究過程中篩選得到的全新的PD-L1抗體不僅可用于同放療聯(lián)合治療腫瘤的藥效和機(jī)制研究。同時還將用于全新PD-L

4、1抗體藥物的研發(fā)，申報專利并臨床轉(zhuǎn)化，填補(bǔ)國內(nèi)該靶點(diǎn)阻斷抗體零申報的突破，帶來巨大的經(jīng)濟(jì)和社會價值。
　　另一方面，建立了Balb/C小鼠Tubo乳腺癌細(xì)胞皮下移植瘤模型，給予不同劑量照射，獲得Balb/C小鼠Tubo乳腺癌放療后穩(wěn)態(tài)模型。進(jìn)一步機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)單次大劑量照射引起腫瘤內(nèi)部免疫反應(yīng)的激活腫瘤，穩(wěn)態(tài)平衡依賴于CD8 T細(xì)胞，同時誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞表面PD-L1上調(diào)。在此基礎(chǔ)上，單次大劑量照射聯(lián)合抗PD-L1阻斷性抗體使皮下腫瘤完