細(xì)鱗魚Cathelicidins的鑒定及宿主防御肽CATH-BRALE的結(jié)構(gòu)與功能分析.pdf

1、細(xì)鱗魚（Brachymystax lenok），國家二級(jí)保護(hù)動(dòng)物，隸屬鮭科細(xì)鱗屬，冷水性魚類，棲息于山溪水溫較低、水質(zhì)清澈的流水中，我國只存在一種，主要分布于我國的東北和秦嶺一帶。根據(jù)細(xì)鱗魚生活的獨(dú)特環(huán)境和棲息條件，我們預(yù)測細(xì)鱗魚體內(nèi)含有某些特殊的宿主防御基因并能分泌相應(yīng)的防御性多肽。Cathelicidins，作為宿主防御基因，是動(dòng)物體內(nèi)多功能的抗微生物肽家族，目前在幾乎所有種類的脊椎動(dòng)物體內(nèi)均有發(fā)現(xiàn)，其不僅對(duì)普通革蘭氏陽性菌、革蘭氏

2、陰性菌、真菌以及病毒具有非常強(qiáng)的抗性，而且對(duì)許多臨床耐藥菌株同樣具有較明顯的作用。除此之外，cathelicidins還具有趨化免疫細(xì)胞、促進(jìn)傷口愈合、誘導(dǎo)血管發(fā)生、誘導(dǎo)變異細(xì)胞系細(xì)胞凋亡等活性。
　　本研究利用分子生物學(xué)技術(shù)，提取了細(xì)鱗魚多種重要組織的RNA，構(gòu)建了相應(yīng)組織的cDNA文庫;并使用半巢式PCR的方法，從脾臟cDNA文庫中克隆得到一種新型cathelicidins家族抗微生物肽:CATH_ BRALE。CATH_BR

3、ALE的前體包含199個(gè)氨基酸，理論等電點(diǎn)(pI)為12.43，理論分子量為5.2006 kDa，含有15個(gè)堿性氨基酸殘基（11個(gè)精氨酸和4個(gè)賴氨酸），靜電荷為+13，是一種較強(qiáng)的堿性多肽。其成熟肽有53個(gè)氨基酸殘基，序列為:RRSKARGGSRGSKMGRKDSKGGSRGRPGSGSRPGGGSSIAGASRGDRGGTRNA。與其他典型的鮭科cathelicidins比對(duì)結(jié)果表明，鮭科cathelicidins普遍都存在一個(gè)包含六

4、個(gè)氨基酸(RPGGGS)的重復(fù)基元，這表明在遺傳的不穩(wěn)定性方面，其表現(xiàn)出和哺乳動(dòng)物cathelicidins一定的相似性。CATH_ BRALE在鰓中有最高的表達(dá)量，其次是脾臟、肝臟，同源建模顯示出的α-helices和反相平行的β-sheets結(jié)構(gòu)，可把CATH_BRALE歸為陽離子的抗菌肽家族。進(jìn)化分析表明，細(xì)鱗魚CATH_BRALE與大西洋鮭的CATH-2有99％的Bootstrap值?；瘜W(xué)合成的CATH_ BRALE對(duì)檢測的40