幽門螺桿菌國內(nèi)流行株動物模型的建立.pdf

1、背景:
　　目前研究幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)在胃炎、胃潰瘍及胃癌等疾病中的致病機制的主要方式是建立動物感染Hp的模型，模擬Hp在人體內(nèi)的致病機制?，F(xiàn)在國外Hp感染動物模型建立的技術(shù)相對成熟。人們成功的從不同動物及人胃中分離出多種螺桿菌，比如貓胃中分離出貓螺旋桿菌(Helicobacterfelis，Hf)等。1997年Lee等人從臨床分離出幽門螺桿菌悉尼株(Helicobacterpylori S

2、ydney strain1 SS1)，此菌株能長期有效的定植在實驗動物胃中，并成功的在實驗動物胃中產(chǎn)生慢性炎癥，萎縮性胃炎，腸上皮化生及不典型增生等病理變化?，F(xiàn)在SS1菌株作為國際標(biāo)準(zhǔn)株，被廣泛的應(yīng)用到動物建模中。用來建立Hp感染模型的動物種類有很多，如沙鼠、小鼠、大鼠、豚鼠、貓、無菌豬、恒河猴等，其中一些動物因價格昂貴、飼養(yǎng)條件高等原因限制其在試驗中的廣泛應(yīng)用，目前蒙古沙鼠和小鼠較為常用。其中，蒙古沙鼠的Hp感染模型能較好復(fù)制Hp在人

3、類的胃中的行為模式，但是蒙古沙鼠也有價格相對較高，飼養(yǎng)方法較復(fù)雜，能產(chǎn)生的抗體及引物有限，缺乏基因轉(zhuǎn)換的特異性等缺陷。最易建立并且容易飼養(yǎng)的嚙齒類動物模型為小鼠，尤其是C57BL/6及FVB小鼠，能夠感染貓螺桿菌及
　　不同種類的Hp，并表現(xiàn)為強烈的輔助性T細胞1(HelperT cell1，Th1)應(yīng)答反應(yīng)，而BALB/c小鼠雖然負荷菌量和C57BL/6差不多，但是其感染后主要產(chǎn)生輔助性T細胞2(Helper T cell2，T

4、h2)細胞因子，對上皮的損傷較小?，F(xiàn)階段，SS1感染的C57BL/6小鼠已經(jīng)成為標(biāo)準(zhǔn)模型。
　　在國內(nèi)，Hp感染相關(guān)的動物模型的建立仍處于初級階段，建模成功率較低，動物模型多為SS1菌株感染C57BL/6小鼠或者BALB/c小鼠，還有部分蒙古沙鼠等。因為不同的菌株對于不同的宿主也會有不同的致病性，我國致病性較強的菌株為vacAS1、cagA、iceA1陽性的Hp菌株，若能建立一個我國流行菌株的標(biāo)準(zhǔn)動物模型，對于我國Hp相關(guān)消化道疾

5、病的研究能夠建立一個更好的研究平臺。
　　目的:
　　本課題通過文獻閱讀確立空泡細胞毒素AS1(vacAS1)、細胞毒素相關(guān)基因A(cagA)、表皮接觸誘導(dǎo)基因A1(iceA1)陽性的臨床分離株為目前國內(nèi)流行株。對6株臨床HP菌株進行基因檢測，選擇vacAS1、cagA、iceA1陽性的菌株作為致病菌。選用無特殊病原體（Specifc pathogen free，SPF）的C57BL/6小鼠為研究對象，來建立國內(nèi)幽門螺桿菌流

6、行株的動物模型，研究vacAS1、cagA、iceA1陽性的幽門螺桿菌流行株感染導(dǎo)致的小鼠胃粘膜改變，為進一步研究致病機制、藥物治療、疫苗研究提供更好的動物模型和研究平臺。
　　方法:
　　先對臨床分離的六株幽門螺桿菌行基因組檢查，確認vacAS1、cagA、iceA1陽性的致病株，并進行培養(yǎng)擴增。取60只SPF級C57BL/6小鼠，隨機分為對照組，模型組，每組30只。對照組正常飼養(yǎng)，模型組經(jīng)口灌服vacAS1、cagA、i

7、ceA1陽性的Hp臨床分離株，每周一次，連續(xù)灌服5周，距末次灌胃后5w，10w，15w，20w，25w，30w分6批處死小鼠，每批次5只。取標(biāo)本行快速尿素酶試驗，Giemsa染色法觀察幽門螺桿菌在胃黏膜上的定植情況，HE染色觀察小鼠胃黏膜的病理變化。
　　結(jié)果:
　　對照組小鼠的胃竇、胃體及十二指腸粘膜的尿素酶試驗，Giemsa染色結(jié)果均陰性，模型組在距末次灌胃后5w，10w，15w，20w，25w，30w幽門螺桿菌定植率分