JS-K對人胃癌細(xì)胞的抑瘤效應(yīng)及其相關(guān)機(jī)制的研究.pdf

1、目的:胃癌是我國的一種常見的消化道惡性腫瘤，由于我國人口眾多且經(jīng)濟(jì)社會發(fā)展的不均衡，我國早期胃癌的就診比例比較低，而進(jìn)展期胃癌的比例很高，這嚴(yán)重降低了患者的5年生存率。目前針對進(jìn)展期胃癌的治療模式主要是D2根治術(shù)聯(lián)合術(shù)后化療。由于臨床常用的化療藥物副作用較大且作用不確定，臨床急需新的治療藥物。JS-K是一種新和成的一氧化氮(NO)前體藥，研究顯示JS-K對多種腫瘤都具有良好的抗腫瘤效應(yīng)，但JS-K在胃癌中的研究尚未見諸報(bào)道。
　　

2、方法:在本研究中，我們通過一系列的體外試驗(yàn)和體內(nèi)試驗(yàn)，對JS-K在胃癌中的抗腫瘤效應(yīng)進(jìn)行評估，并對其具體的作用機(jī)制進(jìn)行探討。我們通過MTT試驗(yàn)、流式細(xì)胞儀檢測技術(shù)、線粒體分離技術(shù)、目的蛋白的質(zhì)粒過表達(dá)、siRNA、Western blot以及胃癌的皮下移植瘤模型等一系列的生化檢測手段對上述問題進(jìn)行研究。
　　結(jié)果:JS-K可以通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡對胃癌細(xì)胞進(jìn)行殺傷，且殺傷效果呈時(shí)間和劑量依賴性。JS-K誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞發(fā)生的凋亡是casp

3、ase依賴性的，泛caspase抑制劑Z-VAD-FMK可以完全阻止JS-K上述的殺傷效果，而caspase3的抑制劑Z-DEVD-FMK和caspase9抑制劑Z-LEHD-FMK只能部分地阻止JS-K的殺傷效果。JS-K通過抑制呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ(ComplexⅠ)和復(fù)合體Ⅳ(ComplexⅣ)使胃癌細(xì)胞活性氧(ROS)的產(chǎn)生增多，同時(shí)又降低SOD1和Catalase這兩種活性氧(ROS)清除蛋白的含量，使活性氧(ROS)在胃癌細(xì)胞內(nèi)累

4、積。細(xì)胞內(nèi)累積的活性氧(ROS)損傷線粒體的功能，使線粒體膜電位下降(△Ψm)，細(xì)胞色素C由線粒體進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，激活caspase9，而活化的caspase9又激活caspase3和剪切PARP從而導(dǎo)致凋亡的發(fā)生。JS-K通過活性氧(ROS)使胃癌細(xì)胞發(fā)生凋亡，而活性氧清除劑N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)可以逆轉(zhuǎn)JS-K的上述作用。JS-K可以降低胃癌細(xì)胞內(nèi)的抗凋亡蛋白Bc l-2和Bcl-xL的含量，而通過質(zhì)粒過表達(dá)Bcl-2和Bcl

5、-xL這兩種蛋白可以保護(hù)胃癌細(xì)胞免受JS-K的殺傷。通過小干擾RNA(siRNA)技術(shù)，我們發(fā)現(xiàn)凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)和核算內(nèi)切酶G(Endo G)的核轉(zhuǎn)位并不參與JS-K誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞發(fā)生的凋亡過程。在體內(nèi)試驗(yàn)中，JS-K可以很好抑制胃癌皮下瘤體積和質(zhì)量的增長，但對小鼠的體重并不產(chǎn)生明顯的影響，說明其生物耐受性良好。
　　結(jié)論:JS-K可以通過使胃癌細(xì)胞累積活性氧(ROS)而損傷線粒體，通過線粒體途徑使胃癌細(xì)胞發(fā)生caspase