2-脫氧葡萄糖和二甲雙胍聯(lián)合用藥對人多囊腎病囊腫上皮細(xì)胞增殖、凋亡和代謝的影響.pdf

1、目的：
　　常染色體顯性多囊腎病(Autosomal dominant polycystic kidney disease，ADPKD)是以腎小管上皮細(xì)胞異常增殖為主要特點(diǎn)的遺傳腎臟病。多囊腎上皮細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞類似，存在糖酵解異常。二甲雙胍和2-脫氧葡萄糖是2種代謝藥，可抑制腫瘤增殖。本研究探討了二甲雙胍和2-脫氧葡萄糖聯(lián)合用藥對人多囊腎病囊腫上皮細(xì)胞系(WT9-7)增殖和凋亡的影響，并探究了其可能的分子作用機(jī)制。
　　方法

2、：
　　1.WT9-7多囊腎上皮細(xì)胞分為對照組、2-DG組、MET組和2-DG+MET組。使用CCK-8法、EdU核酸標(biāo)記技術(shù)檢測各組多囊腎上皮細(xì)胞的增殖能力。
　　2.分析各組多囊腎上皮細(xì)胞中增殖信號通路蛋白分子AMPKα、mTOR、4E-BP1、p70S6K、Akt、PI3K、B-Raf、MEK1/2、MAPK(Erk1/2)的活化水平。
　　3.檢測各組多囊腎上皮細(xì)胞的周期變化及細(xì)胞內(nèi)周期相關(guān)分子CyclinD3

3、、CyclinE1、CDK4、CDK6、P27的表達(dá)水平。
　　4.分析四組多囊腎上皮細(xì)胞中Caspase-3的活性水平及各組細(xì)胞的凋亡率。
　　5.分析四組多囊腎上皮細(xì)胞的代謝方式并檢測各組細(xì)胞中糖酵解關(guān)鍵酶己糖激酶(HK2)和氧化磷酸化復(fù)合物Ⅰ(ComplexⅠ的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.CCK-8和EdU核酸標(biāo)記結(jié)果顯示：單獨(dú)使用2-DG和MET均可抑制細(xì)胞增殖，但小劑量雙藥聯(lián)合使用可顯著抑制多囊腎上

4、皮細(xì)胞增殖(P＜0.001)。
　　2.和對照組相比，2-DG和MET對PKA、mTOR、ERK增殖信號通路分子的活化均有抑制作用，但雙藥聯(lián)合使用效果更為明顯(P＜0.01)。此外，雙藥聯(lián)合使用顯著抑制多囊腎上皮細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)并抑制細(xì)胞復(fù)制使其停滯在G0/G1期。
　　3.單獨(dú)使用2-DG或MET對多囊腎上皮細(xì)胞的凋亡影響較小，但雙藥聯(lián)合使用組細(xì)胞內(nèi)Caspase-3的酶活性水平升高(P＜0.001)且細(xì)胞的早期凋亡

5、率也增加。
　　4.2-DG可下調(diào)多囊腎上皮細(xì)胞內(nèi)HK2的表達(dá)，抑制細(xì)胞的糖酵解水平，減少細(xì)胞內(nèi)ATP的合成量;MET可下調(diào)細(xì)胞中ComplexⅠ的表達(dá)水平，抑制細(xì)胞的氧化磷酸化水平，同時也可抑制細(xì)胞中ATP的合成;但雙藥聯(lián)合使用可同時抑制HK2和ComplexⅠ的表達(dá)，抑制細(xì)胞的兩種代謝方式，顯著降低細(xì)胞內(nèi)ATP的合成(P＜0.001)。
　　結(jié)論：
　　2-DG和MET雙藥聯(lián)合使用可抑制多囊腎上皮細(xì)胞cAMP-PK

6、A、mTOR、ERK增殖相關(guān)信號通路分子的活化，抑制細(xì)胞復(fù)制從而抑制細(xì)胞增殖;雙藥聯(lián)合使用也可促進(jìn)多囊腎上皮細(xì)胞中凋亡執(zhí)行酶Caspase-3的活化，并促進(jìn)細(xì)胞發(fā)生早期凋亡;此外，雙藥聯(lián)合使用可抑制多囊腎上皮細(xì)胞的糖酵解和線粒體氧化磷酸化兩種代謝方式，顯著抑制ATP的產(chǎn)生，促進(jìn)能量感受器AMPK的活化，下調(diào)mTOR增殖信號通路分子的活化水平，抑制WT9-7多囊腎上皮細(xì)胞增殖;由此推斷：2-DG和MET雙藥聯(lián)合使用可通過調(diào)控細(xì)胞的代謝和細(xì)