亞低溫治療對(duì)心肺復(fù)蘇后大鼠腦組織凋亡相關(guān)蛋白和膠質(zhì)纖維酸性蛋白的作用.pdf

1、第一部分：大鼠心肺復(fù)蘇后亞低溫模型的建立與評(píng)估
　　目的：利用窒息法使大鼠心臟驟停后行心肺復(fù)蘇，在復(fù)蘇后使用冰袋誘導(dǎo)低溫，并評(píng)估大鼠心肺復(fù)蘇后的亞低溫模型。
　　方法：將10％水合氯醛（0.3 ml/100 g）注射進(jìn)腹腔內(nèi)用于麻醉，然后氣管切開(kāi)放置氣管插管，將套管插到股動(dòng)脈和股靜脈。然后檢測(cè)動(dòng)脈血壓以及記錄標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ號(hào)導(dǎo)聯(lián)動(dòng)態(tài)心電圖。在距離肛門(mén)1.5厘米處放置探針并使用電子溫度計(jì)來(lái)檢測(cè)直腸溫度。手術(shù)后，讓大鼠情緒穩(wěn)定15分鐘，

2、然后去除心率和血壓明顯異常的大鼠。夾住氣管，使大鼠突然心臟驟停(心電圖表現(xiàn)為心室顫動(dòng)，無(wú)脈性電活動(dòng)或心搏停止，或收縮壓下降到25 mmHg以下并且動(dòng)脈搏動(dòng)消失)。6分鐘后，將夾住的氣管松開(kāi)，并且連接動(dòng)物呼吸機(jī)為其輔助通氣，同時(shí)使用胸外心臟按壓，如果有心室纖維性顫動(dòng)，使用電除顫和利多卡因靜脈注射。當(dāng)自主循環(huán)恢復(fù)(自主循環(huán)標(biāo)準(zhǔn)為HR?170次/分且收縮壓?90 mmHg)，并且自主循環(huán)維持5分鐘后，終止按壓。如果在心肺復(fù)蘇6分鐘后，自主循環(huán)

3、沒(méi)有恢復(fù)，復(fù)蘇終止。當(dāng)自主呼吸恢復(fù)時(shí)，撤除呼吸機(jī)。在監(jiān)測(cè)到自主循環(huán)恢復(fù)35分鐘后，移除股動(dòng)脈以及靜脈插管，縫合。當(dāng)大鼠蘇醒時(shí)，立即0.12 ml/100 g濃度為10%的水合氯醛注入腹腔內(nèi)。在復(fù)蘇后，對(duì)照組在室溫下（25℃）治療，而亞低溫兩組使用冰袋誘導(dǎo)低溫，并且在誘導(dǎo)體溫降低后的30分鐘內(nèi)，達(dá)到最佳溫度(33/30℃)。如果體溫偏離最佳溫度，予以調(diào)節(jié)。如果體溫高于預(yù)期標(biāo)準(zhǔn)，噴稀乙醇或者再結(jié)合電風(fēng)扇使其降低溫度。當(dāng)大鼠的體溫低于預(yù)期標(biāo)準(zhǔn)

4、，將大鼠放于室溫的環(huán)境下使其回溫。體溫的波動(dòng)幅度要控制在±0.3℃內(nèi)。
　　結(jié)果：大鼠在心肺復(fù)蘇后的30分鐘內(nèi)，亞低溫組分別達(dá)到輕度及中度低溫溫度(33/30℃)。
　　結(jié)論：大鼠心肺復(fù)蘇后輕度及中度低溫模型建立成功。
　　第二部分：亞低溫治療對(duì)心肺復(fù)蘇后大鼠腦組織凋亡相關(guān)蛋白的作用
　　目的：探討輕度和中度低溫治療對(duì)心肺復(fù)蘇后大鼠腦組織凋亡相關(guān)蛋白的作用。方法：30只SD大鼠被隨機(jī)分成對(duì)照組(正常體溫)，體溫為

5、33℃輕度低溫組以及
　　體溫為30℃中度低溫組，每組各10只。對(duì)照組大鼠在進(jìn)行心肺復(fù)蘇后，25℃室溫下接受常規(guī)治療，而輕度低溫組以及中度低溫組的大鼠經(jīng)過(guò)心肺復(fù)蘇后，分別接受33℃和30℃低溫治療。所有組經(jīng)過(guò)心肺復(fù)蘇24小時(shí)后，將腦組織取出進(jìn)行研究，并利用免疫組化法檢測(cè)大腦皮層的凋亡相關(guān)蛋白caspase-3，用蛋白免疫印跡法（western blot）檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2以及Bax的表達(dá)。
　　結(jié)果：與對(duì)照組相比，大

6、腦神經(jīng)元亞低溫組的caspase-3明顯下降(p<0.01)，體溫為30℃的低溫組與33℃低溫組相比caspase-3明顯更低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p?0.05)；Bcl-2的表達(dá)在亞低溫組有明顯的增加(p<0.01)，并且體溫為30℃低溫組的增加程度高于體溫為33℃的低溫組(p<0.05)；而B(niǎo)ax的表達(dá)在這三組中無(wú)明顯的區(qū)別。
　　結(jié)論：輕度及中度低溫可以下調(diào)caspase-3，上調(diào)Bcl-2的表達(dá)。顯示了低溫在心肺復(fù)蘇之后有保護(hù)

7、大腦的作用。并且30℃的低體溫療法比33℃的低溫療法有更好的治療作用。
　　第三部分：亞低溫治療對(duì)心肺復(fù)蘇后大鼠腦組織膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)的作用
　　目的：探討亞低溫治療對(duì)心肺復(fù)蘇后大鼠腦組織膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)的作用。
　　方法：30只SD大鼠隨機(jī)分成對(duì)照組(正常體溫)，體溫為33℃的低溫組以及體溫為30℃低溫組，每組各10只。對(duì)照組的大鼠在進(jìn)行心肺復(fù)蘇后，在25℃室溫下接受常規(guī)治療，而輕度低溫組以及

8、中度低溫組的大鼠，經(jīng)過(guò)心肺復(fù)蘇后在亞低溫下進(jìn)行治療。在所有組經(jīng)過(guò)心肺復(fù)蘇24小時(shí)后，將腦組織取出研究，并利用免疫組化法檢測(cè)大腦皮層的膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)表達(dá)。
　　結(jié)果：與對(duì)照組相比，膠質(zhì)纖維酸性蛋白的表達(dá)在亞低溫組中有明顯的增加(p<0.01)。
　　結(jié)論：輕度及中度低溫通過(guò)減少caspase-3的表達(dá)以及增加Bcl-2的表達(dá)去調(diào)控神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白的表達(dá)，引起膠質(zhì)纖維酸性蛋白的表達(dá)上調(diào)，從而促進(jìn)大腦細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)