心安顆粒對(duì)病毒性心肌炎小鼠心肌NF-κB信號(hào)通路及細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　基于NF-κB信號(hào)通路及細(xì)胞凋亡探討心安顆粒對(duì)病毒性心肌炎（VMC）小鼠的保護(hù)作用及可能機(jī)制。
　　方法：
　　120只BALB/c小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為正常組、模型組、利巴韋林組、心安顆粒低、中及高劑量組，每組20只。模型組及各給藥組小鼠腹腔注射0.2ml含103TCID50柯薩奇病毒B3（CVB3）的病毒懸液建立 VMC模型，正常組腹腔注射等體積不含CVB3的培養(yǎng)液。腹腔注射2小時(shí)后開始灌胃，利巴韋

2、林組予利巴韋林片0.2mg/(g?d)，心安顆粒低、中、高劑量組分別予心安顆粒10g、20g、40g（原藥材）/(kg?d)，模型組及正常組灌胃等體積生理鹽水。每天灌胃1次，連續(xù)7天，實(shí)驗(yàn)期間每日觀察并記錄各組小鼠一般狀態(tài)及死亡情況。第8天，稱取各組小鼠體重(body mass,BM)，摘眼球取血后以頸椎脫臼法處死小鼠。分離血清，ELIS A檢測(cè)血清肌鈣蛋白I(cT nI)和一氧化氮(NO)濃度。迅速摘取心臟，電子分析天平稱心臟質(zhì)量(h

3、eart mass,HM)，計(jì)算心臟指數(shù)(HM/BM)；常規(guī)HE染色統(tǒng)計(jì)心肌病理積分；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）法檢測(cè) CVB3 mRNA表達(dá)；Western bolt法檢測(cè)心肌NF-κBp65、P-IκBα及Caspase-3蛋白表達(dá)；免疫組化檢測(cè)TNF-α、IL-6、IFN-γ及CD68巨噬細(xì)胞的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1)小鼠死亡率：正常組無(wú)小鼠死亡。心安顆粒中、高劑量組及利巴韋林組小鼠死亡率較模型組均顯著降

4、低（P＜0.01），低劑量組小鼠死亡率與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與低劑量組比較，中、高劑量組及利巴韋林組小鼠死亡率均明顯降低(P＜0.01）；與利巴韋林組比較，中、高劑量組小鼠死亡率變化均不明顯，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　2)心臟指數(shù)(HM/BM)：與正常組比較，模型組及各藥物組HM/BM均升高(P＜0.05）；與模型組比較，心安顆粒中、高劑量組及利巴韋林組HM/BM均明顯降低(P＜0.01），

5、低劑量組HM/BM變化不明顯（P＞0.05）；與低劑量組比較，中、高劑量組及利巴韋林組HM/BM均顯著降低(P＜0.01）；與利巴韋林組比較，心安顆粒中劑量組變化不明顯，高劑量組HM/BM有所降低，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　3)心肌病理積分：正常組小鼠心肌未見明顯病理學(xué)變化。與模型組比較，心安顆粒中、高劑量組及利巴韋林組小鼠心肌病理積分均顯著降低(P＜0.01），低劑量組小鼠心肌病理積分變化不明顯（P＞0.05）

6、；與低劑量組比較，中、高劑量組及利巴韋林組心肌病理積分明顯降低(P＜0.01）；與利巴韋林組比較，心安顆粒中、高劑量組心肌病理積分略有升高，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　4)心肌CVB3 mRNA表達(dá)水平：正常組小鼠心肌未發(fā)現(xiàn)CVB3 mRNA表達(dá)。與模型組比較，心安顆粒中、高劑量組及利巴韋林組C VB3 mR NA表達(dá)水平均顯著降低(P＜0.01），低劑量組CVB3 mR NA表達(dá)水平無(wú)明顯變化（P＞0.05）；與

7、低劑量組比較，中、高劑量組及利巴韋林組CVB3 mRNA表達(dá)水平均顯著降低(P＜0.01）；與利巴韋林組比較，心安顆粒中、高劑量組CVB3 mRNA表達(dá)水平均降低，以高劑量組降低最明顯(P＜0.05）。
　　5)血清cTnI、NO濃度檢測(cè)：
　　①與正常組比較，模型組及各藥物組血清cTnI濃度均升高(P＜0.05）；與模型組比較，各藥物組血清cTnI濃度均降低（P＜0.05或P＜0.01）；與低劑量組比較，中、高劑量組及利巴

8、韋林組血清cT nI濃度均降低(P＜0.01）；與利巴韋林組比較，心安顆粒中、高劑量組cTnI濃度有所升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　?、谂c正常組比較，模型組及各藥物組血清NO濃度均升高(P＜0.05）；與模型組比較，心安顆粒中、高劑量組及利巴韋林組血清 NO濃度均明顯降低(P＜0.01），低劑量組血清NO濃度無(wú)明顯變化（P＞0.05）；與低劑量組比較，中、高劑量組及利巴韋林組血清NO濃度均顯著降低(P＜0.01）；

9、與利巴韋林組比較，中、高劑量組NO濃度有進(jìn)一步降低趨勢(shì)，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　6)TNF-α、IL-6、IFN-γ蛋白及CD68巨噬細(xì)胞檢測(cè)：
　?、倥c正常組比較，模型組及各藥物組TNF-α蛋白MOD值均升高（P＜0.05）；與模型組比較，心安顆粒中、高劑量組及利巴韋林組TNF-α蛋白MOD值均降低（P＜0.05），低劑量組TNF-α蛋白MOD值與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與低劑量組比

10、較，中、高劑量組及利巴韋林組TNF-α蛋白MO D值均降低（P＜0.05）；與利巴韋林組比較，高劑量組TNF-α蛋白MO D值輕度升高，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　?、谂c正常組比較，模型組及各藥物組IL-6蛋白MOD值均升高（P＜0.05）；與模型組比較，心安顆粒中、高劑量組及利巴韋林組IL-6蛋白MOD值均降低（P＜0.05），低劑量組IL-6蛋白MOD值與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與低劑量組比較，中

11、、高劑量組及利巴韋林組 IL-6蛋白 MOD值均降低（P＜0.05）；與利巴韋林組比較，高劑量組IL-6蛋白MOD值有進(jìn)一步降低趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　③與正常組比較，模型組及各藥物組IFN-γ蛋白MOD值均升高（P＜0.05）；與模型組比較，心安顆粒中、高劑量組及利巴韋林組IFN-γ蛋白MOD值均降低（P＜0.05），低劑量組IFN-γ蛋白MOD值與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與低劑量組比

12、較，中、高劑量組及利巴韋林組IFN-γ蛋白MO D值均降低（P＜0.05）；與利巴韋林組比較，心安顆粒中、高劑量組IFN-γ蛋白MOD值有進(jìn)一步降低趨勢(shì)，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　?、茉谡＝M小鼠心肌中未見CD68陽(yáng)性巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)。與模型組比較，心安顆粒中、高劑量組及利巴韋林組CD68巨噬細(xì)胞數(shù)目明顯減少（P＜0.01），低劑量組CD68巨噬細(xì)胞數(shù)目與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與低劑量組比較，中、

13、高劑量組及利巴韋林組CD68巨噬細(xì)胞數(shù)目顯著減少（P＜0.01）；與利巴韋林組比較，心安顆粒中劑量組CD68巨噬細(xì)胞數(shù)目增加（P＜0.05），高劑量組與利巴韋林組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　7)NF-κB p65、P-IκBα及Caspase-3蛋白檢測(cè)：
　?、倥c正常組比較，模型組及各藥物組NF-κB p65蛋白表達(dá)均增加（P＜0.05）；與模型組比較，心安顆粒中、高劑量組及利巴韋林組NF-κB p65蛋白

14、表達(dá)均降低（P＜0.01），低劑量組NF-κB p65蛋白表達(dá)與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與低劑量組比較，中、高劑量組及利巴韋林組NF-κB p65蛋白表達(dá)均降低（P＜0.01）；與利巴韋林組比較，心安顆粒中、高劑量組NF-κB p65表達(dá)均增加（P＜0.05）。
　?、谂c正常組比較，模型組、利巴韋林組、心安顆粒低、中劑量組心肌P-IκBα蛋白表達(dá)均增加（P＜0.05）；與模型組比較，心安顆粒中、高劑量組及利巴韋

15、林組P-IκBα蛋白表達(dá)均降低（P＜0.01），低劑量組P-IκBα蛋白表達(dá)與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與低劑量組比較，中、高劑量組及利巴韋林組P-IκBα蛋白表達(dá)降低（P＜0.01）；與利巴韋林組比較，心安顆粒高劑量組P-IκBα表達(dá)降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　?、叟c正常組比較，模型組、利巴韋林組、心安顆粒低、中劑量組Caspase-3蛋白表達(dá)均增加（P＜0.05）；與模型組比較，心安顆粒各劑

16、量組Caspase-3蛋白表達(dá)均降低（P＜0.01）；與低劑量組比較，高劑量組Caspase-3蛋白表達(dá)降低（P＜0.05），中劑量組變化不明顯（P＞0.05）；與利巴韋林組比較，心安顆粒各劑量組Caspase-3蛋白表達(dá)均降低（P＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　1)VMC發(fā)病過(guò)程中存在著NF-κB信號(hào)通路的激活及細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
　　2)心安顆粒可明顯緩解VMC小鼠心肌炎癥反應(yīng)和心肌損害，對(duì)心肌具有保護(hù)作用。