冷蒿化學成分研究及初步藥理活性篩選.pdf

1、冷蒿(Artemisia frigida)別名小白蒿，蒙名阿給，為菊科（Compositae）蒿屬小半灌木，具有蒿類的芳香氣味，主要分布于我國內(nèi)蒙古省，此外，吉林、河北、遼寧、青海、陜西、新疆、甘肅、寧夏、以及西南高山地區(qū)均有分布，蒙古、西伯利亞和北美也有分布。其主要生長于草原與荒漠帶，多生長于沙質(zhì)或石質(zhì)土壤中。味苦，具有止血、消腫、制伏癰疽等功能，主治各種出血、關(guān)節(jié)腫脹、腎熱、月經(jīng)不調(diào)、瘡癰。目前，關(guān)于冷蒿的研究中，已有文獻表明其主要

2、成分為倍半萜、黃酮、香豆素類化合物，但是關(guān)于冷蒿更深入的研究還寥寥無幾。本課題組一直進行著冷蒿的相關(guān)研究，前期已在該植物中發(fā)現(xiàn)了幾個具有新穎結(jié)構(gòu)的倍半萜類化合物，并評價了它們的腫瘤細胞增殖抑制活性。為了更有效的開發(fā)該植物的藥用價值，課題組對冷蒿全草進行更深一步的研究，對其二氯甲烷、乙酸乙酯部分的化學成分進行系統(tǒng)的分離純化，并對得到的單體物質(zhì)進行結(jié)構(gòu)鑒定和活性篩選。
　　目的：本研究以冷蒿全草為研究對象，通過柱色譜、薄層色譜、制備高

3、效液相色譜、制備薄層色譜等色譜學方法對其化學成分進行系統(tǒng)的分離純化，建立有效的分離純化方法，得到單體化合物。應(yīng)用UV、MS以及1H-NMR、13C-NMR、1H-1H COSY、HSQC、HMBC、NOESY等波譜學方法對單體化合物進行結(jié)構(gòu)鑒定。再對單體化合物進行活性篩選，以期尋找到具有較好活性的單體化合物，為新藥研發(fā)提供基礎(chǔ)研究。
　　方法：自然干燥的冷蒿全草14 kg經(jīng)適當粉碎后，用95％乙醇加熱回流提取三次，濃縮后得到浸膏約

4、2079.6 g，再用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯依次萃取，濃縮后得浸膏石油醚部分449.2 g，二氯甲烷部分87.6 g，乙酸乙酯部分132.4 g。采用正反相硅膠柱色譜法、聚酰胺柱色譜法、Sephadex LH-20色譜法、制備薄層色譜法及高效液相色譜法對二氯甲烷和乙酸乙酯部分的化學成分進行分離純化，得到單體化合物，采用UV、MS、1H-NMR、13C-NMR、1H-1H COSY、HSQC、HMBC、NOESY等現(xiàn)代光譜、波譜技術(shù)進

5、行結(jié)構(gòu)鑒定，最后進行活性篩選。
　　結(jié)果：通過對冷蒿全草化學成分的分離純化，經(jīng)過鑒定得到26個單體化合物，包括13個黃酮類化合物，10個倍半萜類化合物，1個香豆素類化合物，1個苯乙酮類化合物，1個苯烯酸類化合物。結(jié)果如下：柳穿魚黃素（1），棕矢車菊素（2），金圣草黃素（3），麥黃酮（4），3-羰基-吉瑪-1(10),11(13)-二烯-6α,12-內(nèi)酯（5），蓍素（6），1,10β-環(huán)氧蓍素（7），濱蒿內(nèi)酯（8），4-羥基苯乙酮（

6、9），貓眼草黃素（10），棕鱗矢車菊黃酮素（11），11α,13-二氫魃蒿內(nèi)酯（12），chrysanthemin A（13），異澤蘭黃素（14），澤蘭黃素（15），南艾蒿烯內(nèi)酯（16），6-甲氧基麥黃酮（17）， hanphyllin（18），薊黃素（19），利得亭（20），desacetylmatricarin（21）， subchrysine（22），木犀草素（23），咖啡酸（24），藿香苷（25），田薊苷（26）。
　　活

7、性篩選發(fā)現(xiàn)化合物棕矢車菊素（2）和澤蘭黃素（15）在濃度為20μg/mL時有較弱的PPARγ（過氧化物酶體增長因子活化受體γ）激動活性，激動倍數(shù)分別為2.09和2.50?；衔锪~黃素（1）和金圣草黃素（3）對PTP1B（蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶1B）有中等強度的抑制作用，其IC50值分別為7.42μg/mL和3.95μg/mL。
　　結(jié)論：對冷蒿全草二氯甲烷和乙酸乙酯部位的化學成分進行了系統(tǒng)分離鑒定了26個化合物的結(jié)構(gòu)，其中從該屬首

8、次分離得到化合物為3-羰基-吉瑪-1(10),11(13)-二烯-6α,12-內(nèi)酯（5），1,10β-環(huán)氧蓍素（7），棕鱗矢車菊黃酮素（11），hanphyllin（18），藿香苷（25），田薊苷（26）；從該植物首次分離得到的化合物為貓眼草黃素（10），11α,13-二氫魃蒿內(nèi)酯（12）， chrysanthemin A（13），南艾蒿烯內(nèi)酯（16），6-甲氧基麥黃酮（17）， subchrysine（22）?；衔镒厥杠嚲账兀?）和