川續(xù)斷總皂苷抗骨質疏松研究及緩釋骨架微丸的制備工藝研究.pdf

1、川續(xù)斷為川續(xù)斷科植物川續(xù)斷Dipsacus asper Wall.ex Henry的干燥根。其主要分布為中國的江西、湖北、湖南、廣西、四川等地。因續(xù)斷可以“續(xù)折接骨”而得名。續(xù)斷性微溫，味苦辛，入肝、腎經。秋季采挖，去掉根頭和須根，用微火烘至半干，堆置“發(fā)汗”至內部變墨綠色時，再烘至近干。川續(xù)斷化學成分復雜而多樣化，主要包括皂苷類（三萜皂苷類）、環(huán)烯醚萜類、生物堿類、揮發(fā)油類等其他成分。川續(xù)斷做為骨傷科和婦科常用中藥，臨床上主要應用于腰

2、膝酸軟，風濕痹痛，跌打損傷，崩漏，胎漏。現(xiàn)代藥理學證明，川續(xù)斷具抗骨質疏松、促進骨傷愈合、有抗炎、抗衰老、抗早產、流產、等藥理作用。
　　本文以川續(xù)斷總皂苷和川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量為評價指標，首先建立兩個指標含量測定的方法。供試品加入新配制的5％香草醛-冰醋酸0.4ml，高氯酸1.6ml，密塞搖勻。置于60℃水浴20min后停止反應，取出后立即放入冰水浴中冷卻，然后精密加入冰醋酸10ml，搖勻。于540nm處測定其吸光度從而計算川續(xù)斷

3、總皂苷的含量。實驗選定甲醇濃度、超聲時間、溶媒比為三個主要因素，以川續(xù)斷總皂苷的含量與川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量的綜合評分為最終評價指標，設計正交試驗，優(yōu)選了川續(xù)斷總皂苷的提取工藝，即為加10倍量75%的甲醇超聲提取兩次，每次30min。驗證試驗顯示三批川續(xù)斷總皂苷的含量RSD值為1.12%，川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量RSD值為0.62%，結果表明所得最佳提取工藝簡便可行。
　　實驗將提取的總皂苷粗提液首先依次用石油醚和水飽和正丁醇萃取，然后考察

4、了D101大孔樹脂對總皂苷的純化工藝，最終確定最佳純化工藝為：上樣濃度0.2g/ml（生藥）按2BV/h濕法上樣，上樣量為1BV，最終用6BV、70%乙醇以1BV/h的流速洗脫。三批驗證試驗結果總皂苷純度平均值為59.86%，RSD值0.64%；總皂苷轉移率平均值為83.35%，RSD值1.05%，表明確定的最佳工藝穩(wěn)定，能用于川續(xù)斷總皂苷的分離純化。
　　本實驗測定了川續(xù)斷藥材中4中目標成分含量，結果川續(xù)斷皂苷Ⅵ、馬錢苷、齊墩果

5、酸和熊果酸的含量平均值依次為66.327、2.240、0.157、0.564 mg/g。實驗還建立了70%乙醇洗脫部位的 HPLC指紋圖譜，結果匹配的峰中有13個共有峰，所有共有峰在20～50min內出峰，峰型基線平穩(wěn)，各峰能實現(xiàn)良好的分離，10批川續(xù)斷總皂苷純化液相似度均大于0.9，表明10批川續(xù)斷總皂苷純化液指紋圖譜相似度良好，在川續(xù)斷總皂苷純化液的質量控制方面具有一定的參考意義。
　　實驗考察了川續(xù)斷總皂苷的抗骨質疏松作用，

6、考察了川續(xù)斷總皂苷對成骨細胞增值的影響、對ALP活性的影響和OPG及RANKL mRNA表達的影響，結果低中高劑量組對三個指標均表現(xiàn)出一定程度的促進作用。續(xù)斷總皂苷作用于成骨細胞24、48h，中高劑量組對成骨細胞增殖均有顯著性作用（P＜0.05，P＜0.01），72h時，中劑量組續(xù)斷總皂苷對成骨細胞有顯著性增殖作用（P＜0.05）；各時間段的低劑量組對成骨細胞也表現(xiàn)出一定的增值作用但并沒有顯著性差異；與對照組比較，低中高濃度的續(xù)斷總皂苷

7、對大鼠成骨細胞ALP活性均有促進作用，隨著濃度的增加，促進作用增強。其中中高劑量組促進作用具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，P＜0.01）；續(xù)斷總皂苷對OPGmRNA的表達有促進作用，低中劑量組促進作用有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；同時續(xù)斷總皂苷可抑制RANKLmRNA的表達，隨著濃度增加其抑制作用增強，且低中高劑量組的抑制作用均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）， OPG/RANKL值升高。
　　實驗以總皂苷純化液干粉為主藥，以微晶纖維素