殼聚糖微載體的制備及在細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用研究.pdf

1、微載體細(xì)胞培養(yǎng)是一種實(shí)現(xiàn)貼壁型細(xì)胞在生物反應(yīng)器中大規(guī)模懸浮培養(yǎng)的先進(jìn)技術(shù)。該技術(shù)在國外早已成功被應(yīng)用于多種疫苗、生物酶等生物制品的生產(chǎn)中。近年來，該技術(shù)逐漸在我國生物制藥企業(yè)中興起并推廣。然而我國微載體的開發(fā)起步較晚，目前國產(chǎn)化微載體相對較少，市售的商品化微載體主要依賴進(jìn)口，價格昂貴。因此，研究并開發(fā)適用于動物細(xì)胞培養(yǎng)的微載體仍然是我國生物制藥領(lǐng)域的一個重要課題。作為一種性能優(yōu)良的天然高分子聚合物，殼聚糖來源豐富、價格低廉、生物相容性好

2、，已在生物醫(yī)藥、廢水處理等領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。
　　本文在前人研究的基礎(chǔ)上，以殼聚糖為原料，用乳化交聯(lián)法制備了一種還原型殼聚糖微載體，解決了殼聚糖微球經(jīng)戊二醛交聯(lián)后存在的細(xì)胞毒性殘留問題，使其更適合于動物細(xì)胞的貼附與生長，滿足細(xì)胞培養(yǎng)的需要。
　　論文在參照進(jìn)口 Cytodex1微載體的技術(shù)指標(biāo)基礎(chǔ)上，對制備的還原型殼聚糖微載體從工藝參數(shù)上進(jìn)行了優(yōu)化，對其粒徑分布、表面特征、每克干球的微球數(shù)和比表面積、膨脹體積等參數(shù)及高壓滅

3、菌性能等方面進(jìn)行了優(yōu)化，得到了半透明、表面較光滑、輕微攪拌既能懸浮的還原型殼聚糖微載體，其粒徑分布在110~210μm之間，平均粒徑185um,每克干重的微球數(shù)達(dá)到2.1~2.5×106個/g，每克干重的表面積可達(dá)2256~2686cm2，膨脹體積10~11mL/g，比重1.07g，能夠耐受121℃30min的常規(guī)高壓滅菌，連續(xù)高壓5次不變形，同時能夠耐受0.25％胰蛋白酶的消化，性質(zhì)穩(wěn)定；以上指標(biāo)表明，通過乳化交聯(lián)法制備的還原型殼聚糖

4、微載體，粒徑較均勻，可用常規(guī)方法進(jìn)行高壓滅菌，在液體中呈淡黃色半透明狀，細(xì)胞在其表面生長后，可直接在光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)。接下來對制備的還原型殼聚糖微載進(jìn)行了理化性質(zhì)的檢測。以進(jìn)口 Cytodex1微載體為對照，以3g/L載體量和1.6×105cells/mL的細(xì)胞密度接種，在125mL懸浮培養(yǎng)瓶中對敘利亞地鼠腎細(xì)胞（BHK-21）、中華倉鼠卵巢細(xì)胞（CHO）和恒河猴腎細(xì)胞（Marc-145）這三種疫苗生產(chǎn)常用的細(xì)胞進(jìn)行殼聚糖微