擬南芥花藥絨氈層發(fā)育轉(zhuǎn)錄調(diào)控通路及關(guān)鍵基因TDF1功能研究.pdf

1、擬南芥絨氈層發(fā)育及功能相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)對(duì)成熟花藥發(fā)育起到重要的作用，因此，本課題基于之前對(duì)絨氈層發(fā)育調(diào)控通路的研究，進(jìn)一步利用細(xì)胞學(xué)、原位雜交的技術(shù)分析了絨氈層5個(gè)轉(zhuǎn)錄因子(DYT1 TDF1 AMS MYB103 MS1)的遺傳關(guān)系，明確了其在調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的上下游關(guān)系。此外，對(duì)R2R3－MYB家族轉(zhuǎn)錄因子TD目的功能進(jìn)行深入分析。首先，構(gòu)建帶有MYC/FLAG標(biāo)簽的基因突變體轉(zhuǎn)基因株系，并進(jìn)行互補(bǔ)鑒定。其次，建立ChIP實(shí)驗(yàn)體系，

2、預(yù)期利用ChIP技術(shù)富集能被TDF1特異識(shí)別結(jié)合的下游基因。第三，基因芯片數(shù)據(jù)顯示在tdf1突變體花苞中共有1790個(gè)基因有明顯的表達(dá)變化(其中1252個(gè)基因下調(diào)，538個(gè)基因上調(diào))，針對(duì)TDF1下調(diào)基因，通過多角度的生物信息學(xué)表達(dá)譜、功能聚類與啟動(dòng)子的分析，預(yù)測(cè)若干TDF1直接調(diào)控的下游候選基因。同時(shí)，對(duì)TDF1原核蛋白進(jìn)行表達(dá)及復(fù)性，并通過酵母雙雜交分析TD目的轉(zhuǎn)錄功能域。本課題實(shí)驗(yàn)結(jié)果將進(jìn)一步的闡明了絨氈層特異轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，