表面等離子共振技術(shù)和熒光光譜法研究生物分子相互作用.pdf

1、第一章綜述了表面等離子共振(SPR)技術(shù)的原理、特點(diǎn)、研究?jī)?nèi)容及應(yīng)用，并詳細(xì)介紹了瑞典的BIAcore X型SPR生物傳感器組成及特點(diǎn)。簡(jiǎn)單概述了熒光光譜法及其在藥物與生物大分子相互作用中的研究?jī)?nèi)容。在此基礎(chǔ)上，提出了自己的研究?jī)?nèi)容。
　　第二章運(yùn)用SPR技術(shù)研究了人免疫球蛋白G（人IgG）與其抗體的特異性結(jié)合作用。考察了包括pH值、離子強(qiáng)度、蛋白質(zhì)濃度等影響人IgG在傳感芯片表面的預(yù)結(jié)合的影響因素。選取最優(yōu)條件將其固定在芯片表面

2、，抗體流過(guò)后與固定物特異性結(jié)合，考察了芯片表面的再生條件。根據(jù)傳感圖譜，運(yùn)用軟件分析得到結(jié)合動(dòng)力學(xué)常數(shù)Ka=9.37×104L·mol-1·s-1，解離常數(shù)Kd=3.83×10-3s-1。親和力常數(shù)KD=4.09×10-8mol·L-1。
　　第三章運(yùn)用表面等離子共振技術(shù)，采用競(jìng)爭(zhēng)抑制分析法，研究了氯霉素與其抗體的相互作用。通過(guò)將小分子氯霉素與牛血清白蛋白的偶聯(lián)物固定在芯片上，將抗體與氯霉素作為分析物流過(guò)芯片表面，實(shí)時(shí)檢測(cè)相互作用

3、過(guò)程。氯霉素的檢測(cè)范圍為0～20ng/mL內(nèi)構(gòu)建了標(biāo)準(zhǔn)曲線。
　　第四章利用熒光光譜法研究了VB12與牛血清蛋白(BSA)的相互作用。得出VB12對(duì)BSA的猝滅為靜態(tài)猝滅機(jī)制。計(jì)算得出二者結(jié)合常數(shù)KA=1.00×105L/mol，結(jié)合位點(diǎn)數(shù)n=1.07。根據(jù)非輻射的能量轉(zhuǎn)移理論計(jì)算得出VB12與BSA的結(jié)合位置距離212位的色氨酸殘基為6.29nm。同時(shí)用同步熒光光譜法探討了VB12對(duì)酪氨酸和色氨酸殘基的影響。
　　第五章通