滸苔多糖酶解產(chǎn)物的分離純化及活性研究.pdf

1、滸苔是我國東南沿海的一種大型經(jīng)濟性綠藻，本身可以食用，并含有多種活性物質。據(jù)文獻報道，滸苔多糖具有提高哺乳動物免疫力、降血脂、消炎抗菌以及抗衰老等生理功能。但是，環(huán)境的改變會引起滸苔爆發(fā)性繁殖并產(chǎn)生綠潮，一般都是將其掩埋，沒有從根本上解決問題。因此，對滸苔多糖進行研究不僅可以提高滸苔利用率，還能為滸苔深加工成功能性食品奠定基礎。本文以滸苔為原料，用酶法對滸苔水提多糖進行水解，對酶解多糖進行抗氧化活性研究，并對活性最佳組分進行分離純化，將

2、所得到的均一多糖進行結構和活性的初步研究，為滸苔多糖和酶解多糖的開發(fā)與利用提供實驗基礎。主要的研究結果如下:
　　1.對糖化酶、果膠酶、纖維素酶、α-淀粉酶、脂肪酶5種酶的篩選結果表明，糖化酶和果膠酶能有效催化滸苔水提多糖的水解。采用響應面方法優(yōu)化酶解條件，得出糖化酶酶解多糖的最優(yōu)酶解工藝是糖化酶酶濃度為14.20 U/mL，反應溫度為48.70℃，pH為4.48，在此條件下水解5h，實際測得多糖酶解率為12.65％;得出果膠酶酶

3、解多糖的最優(yōu)酶解工藝是果膠酶加酶量為多糖的7.80％，pH為4.45，反應溫度為55.56℃，在此條件下水解5h，實際測得多糖酶解率為12.71％。
　　2.將滸苔多糖用糖化酶和果膠酶分別酶解0h、1h、2h、3h、4h和5h，發(fā)現(xiàn)酶解多糖對三種自由基（DPPH、·OH、·O2-）的清除效果均優(yōu)于未酶解多糖;而果膠酶酶解多糖對這三種自由基的清除率均好于糖化酶酶解多糖;并且果膠酶酶解3h的滸苔多糖的清除效果為最佳，其在5 mg/mL

4、的濃度下DPPH清除率為58.32％，·OH清除率為44.68％，·O2-清除率為78.31％，并將該多糖組分命名為EPCE。凝膠滲透色譜法(GPC)測得EPCE的分子量范圍為9.5×103～1.7×105;GC-MS法測定EPCE的單糖組成，結果表明EPCE主要是由鼠李糖、木糖組成，還含有少量的甘露糖、葡萄糖和半乳糖，且各單糖的摩爾百分比分別為71.72％∶10.6％∶6.33％∶8.85％∶2.5％。
　　3.采用纖維素DEA

5、E-52和Sephadex G-100對EPCE進行進一步分離純化，洗脫出一個中性多糖組分EPCE1和兩個酸性多糖組分EPCE2和 EPCE3。紫外光譜表明，EPCE1和EPCE2都不含核酸和蛋白質等雜質，而EPCE3在280 nm處有很低吸收峰，說明此多糖可能還有少量結合糖蛋白;HPLC結果顯示EPCE1、EPCE2和EPCE3這三者的峰型為單一峰，說明三者為均一組分。另外，體外抗氧化活性研究表明，酸性多糖EPCE2的抗氧化活性最佳，