黃酮類化合物和抗生素類藥物的高效液相色譜檢測技術研究.pdf

1、化學發(fā)光(chemiluminescence，簡稱CL)是化學反應的反應物或是生成物吸收了反應過程中釋放的化學能，電子由基態(tài)躍遷至激發(fā)態(tài)，再由激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時所產(chǎn)生的光輻射，根據(jù)化學發(fā)光反應在某一時刻的發(fā)光強度或發(fā)光總量來確定反應中的響應組分含量的分析方法叫做化學發(fā)光分析法。此法具有靈敏度高、線性范圍寬、儀器簡單、分析快速等優(yōu)點。化學發(fā)光檢測亦可與高效的分離手段如：高效液相色譜、毛細管電泳等聯(lián)用，有效克服化學發(fā)光分析法固有的選則性差的缺

2、點，成為一種有效的痕量分析方法，在環(huán)境科學、藥物分析及生命科學等領域中具有廣泛的應用前景。將具有高分離效率的高效液相色譜(HPLC)分離法與具有高靈敏度的化學發(fā)光分析法相結合己引起了國內外分析化學家的極大關注，成為從上個世紀80年代末至今分析化學研究的一大熱點。毫無疑問，高效液相色譜分離技術與化學發(fā)光檢測法的聯(lián)用將在生物、臨床醫(yī)學、環(huán)境檢測、藥物分析等領域得到愈來愈廣泛的應用。 本文包括兩個部分。第一部分是綜述，這部分結合化學發(fā)

3、光分析法，評述了近十年高效液相色譜及其與化學發(fā)光柱后檢測技術在黃酮類化合物和抗生素類藥物中的應用。 第二部分是研究報告。第一節(jié)是高效液相色譜化學發(fā)光檢測法在黃酮類化合物中的研究。詳細研究了在堿性條件下，鐵氰化鉀氧化魯米諾產(chǎn)生化學發(fā)光，而漆黃素能增強發(fā)光信號，從而建立了簡單、靈敏、快速測定漆黃素高效液相色譜化學發(fā)光新方法。 第二節(jié)是高效液相色譜檢測技術在抗生素類藥物中的應用。研究了在C18反相色譜柱，采用UV-VIS檢測器

4、，磷酸二氫鉀-磷酸(pH 4.0)緩沖液為流動相于211 nm下檢測新型抗生素中間體S-AMOSA；并研究了FMOC柱前衍生法測定S-AMOSA，以9-氯甲酸芴甲酯(FMOC)為衍生劑，與S-AMOSA發(fā)生衍生反應后，反相高效液相色譜法測定的方法。本法快速、簡單、準確度高，適用于測定新型抗生素中間體S-AMOSA。 1.漆黃素的高效液相色譜化學發(fā)光檢測法研究 本文研究發(fā)現(xiàn)，漆黃素在堿性條件下能大大增強Luminol-K3

5、Fe(CN)6化學發(fā)光強度，基于此，并結合HPLC分離技術，建立起漆黃素的HPLC-CL分析新方法。在C18反相鍵合相色譜柱，甲醇為流動相的條件下，實現(xiàn)了對人體血清中的漆黃素的分離與測定，方法的線性范圍為7.7× 10-6～9.6×10-4 g/L，相關系數(shù)為r=0.9998，檢出限為2.7×10-7 g/L，RSD為2.41％(n=11)。實驗表明該法快速、簡單、準確度高，適用于漆黃素的測定。 2.RP-HPLC法測定新型抗

6、生素中間體S-AMOSA 建立快速、靈敏的反相高效液相色譜法測定新型抗生素中間體S-AMOSA的濃度。采用島津SPD-6AV檢測器，Hypersil C18(150 mm×4.6 mm，5.0μm)色譜柱，磷酸二氫鉀-磷酸(pH 4.0)緩沖液為流動相，柱溫為室溫時，于211nm波長處以外標法測定。結果表明S-AMOSA在4.8～120μg/mL的范圍內呈良好的線性關系(r=0.9999)。方法回收率為98.0％～103.0％。

7、實驗表明該法簡便、快速、有效，重現(xiàn)性好，首次用于抗生素中間體S-AMOSA的測定，取得了很好的結果。 3.FMOC柱前衍生-高效液相色譜法測定新型抗生素中間體S-AMOSA 建立FMOC柱前衍生測定新型抗生素中間體S-AMOSA的高效液相色譜方法。以9-氯甲酸芴甲酯(FMOC)為衍生劑，與S-AMOSA發(fā)生衍生反應后，反相高效液相色譜法測定。以甲醇-水為流動相，C18柱為分離柱，紫外可見檢測器(263 nm)檢測。結果表

8、明S-AMOSA在0.01125～0.36 g/L的范圍內呈良好的線性關系(r=0.9996)。方法回收率為97.78％～102.33％。實驗表明該法快速、簡單、準確度高，適用于新型抗生素中間體S-AMOSA的測定。 4.RP-HPLC法分離測定動物肝臟中多種維生素的含量 建立了一種同時測定4種水溶性維生素的高效液相色譜方法。采用Shimadzu VP-ODS(150mm×4.6 mm i.d.，5.0 μm)色譜柱，以