光譜分析在環(huán)境及生物化學分析中的應用.pdf

1、經(jīng)典熒光分析法和近二十年快速發(fā)展起來的共振光散射分析法作為重要的光譜分析法，在很多領域發(fā)揮著重要的作用。熒光分析法靈敏度高，選擇性好，但要求被分析物或熒光探針具有能產(chǎn)生熒光發(fā)射的特定結構，因此應用范圍有限。而共振光散射分析法不受此結構限制，具有實驗操作簡單，靈敏度高等優(yōu)點，但是選擇性較差。熒光和光散射信號在測定過程中都容易受到儀器操作條件，樣品介質，周圍環(huán)境的影響，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性有待提高，因此隨著光譜分析法的進一步發(fā)展和應用的迫切要求，

2、有必要不斷尋找新的熒光探針和光散射探針，并對方法的某些局限性進行不斷的改進和完善，以拓展其應用范圍。
　　 本文根據(jù)在普通熒光光度計上單次掃描獲得的共振光散射信號的增強與降低的比值建立了光散射雙波長比率分析法，提高了散射分析法的穩(wěn)定性和簡化了雙波長比率法的操作步驟，并成功用于槲皮素的分析側定。在環(huán)境及生物化學分析領域中尋找新的熒光和散射探針方面，利用BR緩沖溶液與鉛離子相互作用散射信號增強，建立了一種極其簡單的鉛離子共振光散射法

3、；設計了一段頸環(huán)結構的aptamer序列，利用有機小分子染料Syber Green Ⅰ與單鏈DNA和雙鏈DNA的不同熒光性質，建立了簡單、快速、靈敏的PrPC分析方法。具體研究內(nèi)容如下：
　　 (1)以染料Syber Green Ⅰ作為熒光探針，利用熒光光譜研究了人重組細胞型朊病毒蛋白PrP與aptamer的特異性作用。結果表明，Syber Green Ⅰ染料嵌入頸環(huán)結構aptamer的頸部堿基對中導致熒光增強，而朊蛋白的加入又

4、能對這種增強的熒光起到明顯的猝滅效果。當朊蛋白濃度為3.69-516.6 nmol/L時，朊蛋白濃度與熒光信號強度呈很好的線性關系，相關系數(shù)R為0.998，線性方程IF=647.986-0.914×cPrP，檢測限為2.42 nmol/L(3σ)，據(jù)此建立了簡單快速靈敏的朊蛋白的分析測定方法。
　　 (2)利用鉛離子與BR緩沖溶液的相互作用，在普通熒光光度計上掃描獲得的光散射信號的強度與鉛離子的濃度線性相關，建立了一種簡單的測定

5、鉛含量的分析方法。該方法與其他鉛測定的方法相比，具有體系簡單，條件容易控制，操作步驟簡單，成本低廉，效率高等優(yōu)勢。
　　 (3)以槲皮素(QT)與鋁(Ⅲ)的相互作用為例，建立了基于單次掃描光譜獲得共振光散射信號升降變化的一種全新雙波長比率法。鋁(Ⅲ)在醋酸-醋酸鈉緩沖溶液中形成的羥基配合物，隨槲皮素加入，槲皮素將羥基配合物中的鋁競爭下來形成槲皮素與鋁的配合物，使得280nm處的散射強度(IRLS 280)降低，444nm處的散射