人釉原蛋白真核表達載體pcdna3.1amg在哺乳動物細胞系及哺乳動物體內表達的研究

1、四川大學博士學位論文人釉原蛋白真核表達載體PcDNA3.1-AMG在哺乳動物細胞系及哺乳動物體內表達的研究姓名：趙川江申請學位級別：博士專業(yè)：口腔臨床醫(yī)學指導教師：章錦才20030416P c D N A 3 ．1 一A M G 能夠在哺乳動物細胞表達和分泌，可以用于間接法基因治療以及基因工程體外制備重組釉販蛋白。②選擇成年家犬一只，在其下頜骨雙側磨牙區(qū)頰側常規(guī)翻瓣，去除第一磨牙近中根頰側牙槽骨、牙周韌帶和牙骨質至釉牙骨質界下6 m m

2、 ，造成牙周骨缺損模型，而后在兩側骨缺損區(qū)分別放置P c D N A 3 ．1 ．A M G ( 實驗區(qū)) 和P c D N A 3 ．】( 對照區(qū)) 穩(wěn)定轉染細胞培養(yǎng)液制備成的凍干粉3 0 0 r a g ，復位縫合粘骨膜瓣。術后8 周處死動物，立即截取手術部位頒骨標本制備組織學切片，光鏡下觀察牙周組織的再生情況。結果顯示實驗區(qū)有牙骨質、牙槽骨和牙周韌帶的再生，牙骨質再生達5 8 - 3 ％，新生牙骨質為無細胞牙骨質，有膠原纖維穿通；

3、牙槽骨再生為6 7 ．2 ％。對照區(qū)牙骨質和牙槽骨再生均不明顯，分別為8 ．3 ％和1 0 ．7 ％。表明重組質粒在C O S ．1 細胞的表達產(chǎn)物具有正常的生物學活性。實驗二重組質粒P c D N A 3 ．1 - A M G 在小鼠肌肉組織內的表達選取B a l b ／C ( 2 0 ．2 5 9 ) 雌性小鼠2 只，于小鼠右側小腿脛前肌同一部位處注射質粒，第一只注射重組質粒P c D N A 3 。1 - A M G 共1 0 0

4、 9 9／2 0 0 9 Id d H 2 0 ，第二只注射質粒P c D N A 3 ．1 共1 0 0 9 9 t 2 0 0 9 l d d H 2 0 ·于注射后7 天處死小鼠，將小鼠肌肉標本制備成組織學切片，L S A B法檢測重組蛋白的表達。免疫組化染色結果顯示，注射P c D N A 3 ．1 - A M O 的艦肉組織的艦細胞和細胞問質中均有明顯的棕色著色：而注射P c D N A 3 ．1 的肌肉組織的肌細胞