長鏈非編碼rnauc.48小干擾rna對2型糖尿病大鼠糖尿病神經(jīng)病理性疼痛的作用研究

1、 I 分類號： 密級： U D C ：學號：401531813313 南 昌 大 學 研 究 生 學 位 論 文 長鏈非編碼 RNAuc.48+小干擾 RNA 對 2 型糖尿病大鼠糖尿病神經(jīng)病理性疼痛的作用研究長鏈非編碼 RNAuc.48+小干擾 RNA 對 2 型糖尿病大鼠糖尿病神經(jīng)病理性疼痛的作用研究 Study in th

2、e effect of LncRNAuc.48+ siRNA on diabetic neuropathic pain of type 2 diabetic rats 黃莉萍 培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學基礎醫(yī)學院 指導教師姓名、職稱：高云 教授 申請學位的學科門類：神經(jīng)生物學專業(yè) 學科專業(yè)名稱：生物學 論文答辯日期： 2016 年 5 月 答辯委員會主席： 評閱人： 2016 年

3、5 月 摘要 II 摘 要 摘 要 目的： 目的：文獻報道長非編碼 RNA(long noncoding RNA, lncRNA)表達水平變化及影響 lncRNA 改變的因素與神經(jīng)系統(tǒng)疾病發(fā)病相關。本項目研究長非編碼RNAuc.48+小干擾 RNA 對糖尿病神經(jīng)病理性疼痛 （diabetic neuropathic pain, DNP)大鼠背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglion, DRG)和脊髓(spinal cor

4、d, SC) 中的降鈣素基因相關肽(calcitonin gene related peptide, CGRP)和嘌呤受體 2X7(purinergic 2X7 receptor, P2X7R)介導疼痛中的作用及可能機理， 為糖尿病神經(jīng)病理性疼痛防治提供實驗基礎和治療靶點。 方法： 方法：SD 雄性大鼠高糖高脂喂養(yǎng) 4 周，兩次小劑量腹腔注射鏈脲佐霉素(streptozotocin, STZ)， 3 天后測得空腹血糖≥11.1mmol/

5、L 大鼠為 2 型糖尿病大鼠。連續(xù)測 3 周機械縮足反射閾值(mechanical withdrawl threshold, MWT)和熱縮足反射潛伏期(thermal withdrawl latency, TWL)，測得 MWT、TWL 值低于基礎值的80％以下者為 2 型糖尿病神經(jīng)病理性痛大鼠。利用隨機分組法，將 2 型糖尿病神經(jīng)病理性痛大鼠分為 4 組(n=36)：(1)正常對照組(Control 組)，(2)糖尿病神經(jīng)病理性痛+

6、生理鹽水組(DNP 組)，(3)糖尿病神經(jīng)病理性痛+uc.48+小干擾 RNA 組(DNP+uc.48 +siRNA 組)，(4)糖尿病神經(jīng)病理性痛+ uc.48+小干擾 RNA 陰性對照組(DNP+scramble siRNA 組）。鞘內注射 lncRNAuc.48+小干擾 RNA3 天后，觀察小干擾對 DNP 大鼠 MWT 和 TWL 閾值的影響，取腰椎 L4-6 段 DRGs 和 SC，逆 轉 錄 聚 合 酶 鏈 式 反 應 法

7、(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)、免疫組織化學法(immunohistochemistry, IHC)和蛋白印跡(westen blot, WB)等方法觀察 DRG 和 SC 中 CGRP 和 P2X7R 的表達變化， 并用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)方法測定血清中白細胞介素-1β(in

8、terleukin, IL-1β)和腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor, TNF-α)水平變化和WB 方法觀察 DRG 和 SC 中 p38 和 ERK1/2 通路磷酸化情況。 結果： 結果：建模成功后 DNP 組大鼠的 TWL、MWT 與正常組相比較顯著下降(P<0.01), uc.48+小干擾 RNA 組可以顯著升高降低的 MWT 和 TWL(P<0.01)； RT-PCR、IHC 和 WB 結