新生鼠腎臟急性缺血再灌注損傷aqp1、2、3、4表達(dá)和na39;k39;atpase活性改變及其相關(guān)性研究

1、廣州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文新生鼠腎臟急性缺血再灌注損傷AQP1、2、3、4表達(dá)和Na-K-ATPase活性改變及其相關(guān)性研究姓名：蔣豐智申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：兒科學(xué)指導(dǎo)教師：崔其亮20090501廣州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文速眠新腹腔注射麻醉，使大鼠仰臥位固定于手術(shù)臺上，腹部去毛后以新潔爾滅局部消毒，沿腹正中線縱行切口打開腹腔，先暴露右腎，分離出右腎蒂及右輸尿管，以卜0 絲線分別結(jié)扎整個腎蒂和右輸尿管；暴露左腎并分離出左腎蒂，用無創(chuàng)傷性夾鉗夾閉

2、腎蒂3 0 m i n 后，松夾恢復(fù)腎灌注，此時。腎臟顏色先由鮮紅色轉(zhuǎn)為蒼白或暗紅色，再變成鮮紅色，表明再灌注成功；觀察術(shù)野無出血和滲血后逐層縫合關(guān)閉腹腔。S h a m 組麻醉、打開腹腔等方式均同上，暴露左右兩腎后鈍性分離腎包膜即可。實驗組行對側(cè)腎結(jié)扎使腎臟缺血3 0 m i n ，按復(fù)流后O h 、0 ．5 h 、2 h 、4 h 、6 h 分5 小組，每小組6 只。2 ．檢測指標(biāo)①采用透射電鏡觀察腎組織超微結(jié)構(gòu)變化，了解缺氧缺血后

3、腎組織細(xì)胞損傷變化特點。②測定血清肌酐( C r e a t i n i n e ，C r ) 水平，以反映腎功能受損程度。③以免疫組化、R T —P C R 檢測各組腎組織標(biāo)本中A Q P l ～4 的表達(dá)情況。④以定磷法測定腎組織中N a + 一K + - A T P a s e 活性。[ 結(jié)果]1 ．電鏡下受損腎組織的。腎小管細(xì)胞微絨毛減少，腎小管部分細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，其間可見凋亡細(xì)胞存在，凋亡細(xì)胞胞漿呈疏松、水腫、空泡形成，以及核固

4、縮表現(xiàn)。部分線粒體腫脹、嵴模糊、斷裂，基質(zhì)出現(xiàn)部分透明區(qū)，以及線粒體空化變性。隨后時間點的觀察可見凋亡細(xì)胞逐漸增多和線粒體空化現(xiàn)象逐漸明顯。2 ．新生鼠腎缺血及再灌注后血清C r 不斷升高，提示腎功能損傷逐漸加重。3 ．腎組織中A Q P l ～4 的表達(dá)水平于缺血再灌注后O h 、0 ．5 h 、2 h 、4 h 、6 h 各時間點均明顯低于對照組，統(tǒng)計學(xué)上有顯著性差異( P ( O ．0 1 ) ，且各時間點之間有差異性變化，其時相

5、變化與超微結(jié)構(gòu)改變一致。4 ．N a + - K + - A T P a s e 活性于缺血后隨時間推移不斷降低；N a + 一K ' - A T P a s e 活性變化與A Q P l ～4 表達(dá)的相關(guān)性分析提示兩項指標(biāo)相關(guān)性強(qiáng)( R = 0 ．7 9 ～O ．9 2 ) ，其中以A Q P l相關(guān)性最大。[ 結(jié)論]1 ．采用對側(cè)腎蒂結(jié)扎、單側(cè)腎蒂夾閉后恢復(fù)血液灌注可成功建立由I R I 導(dǎo)致的新生鼠動物模型，本實驗對象腎功