脂肪酸甲酯化方法

1、一、主題內容與適用范圍本標準適用于所有的動植物油脂和脂肪酸。二、目的油脂及脂肪酸（特別是12碳以上的長碳鏈脂肪酸）一般不直接進行氣相色譜分析，其原因是脂肪酸脂肪酸及油脂的沸點高，高溫下不穩(wěn)定，易裂解，分析中易造成損失。因此，對脂肪酸及油脂的脂肪酸組分分析時，先將脂肪酸或油脂與甲醇反映，制備脂肪酸甲酯，降低沸點，提高穩(wěn)定性，然后進行氣相色譜分析。三、BF3甲酯化法1、儀器（1）50ml及100ml磨口圓底燒瓶（2）回流冷凝器（長度20～3

2、0cm，有磨口連接，與燒瓶配套）（3）250ml分液漏斗（4）滴管（5）帶磨口玻璃塞的試管（6）10ml移液管（7）沸石2、試劑（1）正庚烷，色譜純（2）輕汽油（沸程40～60℃）（3）無水硫酸鈉，分析純（4）0.5M的氫氧化鈉甲醇溶液（不用標定），配制如下：稱取2gNaOH溶于100ml甲醇中（甲醇的含水量不得超過0.5％），該溶液放置一段時間后會出現(xiàn)白色沉淀，這不影響脂肪酸甲酯化制備。（5）12～25％（mm）BF3的甲酯溶液（6）

3、飽和的NaCl水溶液（7）甲基紅指示劑：用60％的乙醇配置0.1％的甲基紅溶液（8）氮氣：含氧量低于5mgkg3、操作方法，（1）取大約350mg油樣加入50ml燒杯中，移取6ml0.5M的NaOH于油樣中，并加入幾粒沸石，連接回流裝置，開始加熱回流，回流過程中要不斷搖動燒瓶。（2）當燒瓶內的油珠消失，溶液變得透明時（大約需要5～10分鐘），從冷凝器上端加7mlBF3甲醇溶液于燒杯內（用移液管移?。?，然后繼續(xù)回流1分鐘。（3）然后從冷凝

4、管上端加入2～5ml正庚烷后，再回流1分鐘。（4）撤離火源，取出燒瓶，向燒瓶中加入一定量的飽和NaCl溶液，輕輕上下顛倒數次后，靜置分層。（5）從燒杯內的上層溶液中取出約1ml轉移到磨口試管中，并加入適量的無水硫酸鈉，以去除痕量的水分，得到的此甲酯化樣品以備氣相色譜分析用。4、注解（1）BF3有毒，因此該試驗應在通風廚中進行，同時，用后的所有玻璃儀器應立即清洗；（2）如果待測脂肪酸或構成油脂的脂肪酸含有2個以上的雙鍵，建議反應的燒杯中先

5、充氮處理；五、酸催化甲酯化——適用于AV2的油脂或脂肪酸1、儀器（1）250ml磨口錐形或圓底燒瓶（2）與燒瓶配套的回流冷凝器（3）50ml錐形瓶（4）150ml或250ml的分液漏斗!（5）電熱磁力攪拌器（6）沸石72、試劑（1）正庚烷，色譜純（2）無水硫酸鈉，分析純（3）甲醇鈉溶液（不用標定），配制如下：稱取1gNaOH溶于100ml甲醇中（甲醇的含水量不得超過0.5％）（4）甲基紅指示劑：用60％的乙醇配置0.1％的甲基紅溶液（5

6、）氮氣：含氧量低于5mgkg（6）1MHCl甲醇溶液（無水，不需標定）3、操作方法（1）取約4g油樣于燒杯中；（2）移取40ml甲醇鈉溶液于燒瓶中，并加入幾粒沸石，連接回流裝置，開始加熱回流，回流過程中要不斷搖動燒瓶，直至溶液澄清透明為止（大約需要10～15分鐘），在加入50ml1M得HCl甲醇溶液于燒瓶中，再煮沸10分鐘；（3）撤離熱源，取出燒瓶，并在冷水中冷卻燒瓶；（4）于燒瓶中加入100ml蒸餾水，然后將燒瓶內的內容物轉移到分液漏

7、斗中，并加入30ml正庚烷后，劇烈搖動分液漏斗，靜置分層，將放出的下層溶液用30ml正庚烷萃取，萃取的上層溶液倒回分液漏斗中，用蒸餾水對分液漏斗內的脂肪酸酯的正庚烷溶液進行多次洗滌，直至廢水層呈中性為止；（5）得到的酯層溶液用無水硫酸鈉干燥后，過濾，蒸發(fā)得到約20ml的脂肪酸甲酯的正庚烷溶液，以備分析用。4、注解（1）若待分析樣為脂肪酸時，則可直接取約4g脂肪酸，加入50mlHCl甲醇溶液及沸石，加熱回流10分鐘，其余同3、4、5。（2