er受體測(cè)定

1、雌激素受體及孕激素受體測(cè)定雌激素受體及孕激素受體測(cè)定人乳腺癌組織中，有60～70％的組織存在雌激素受體(ER)及／或孕激素受體(PR)，其存在狀況與診斷、治療及判斷預(yù)后有關(guān)。受體陽(yáng)性者約60％用抗相應(yīng)受體治療有效；陰性者亦有10％的有效反應(yīng)率。測(cè)定ER及PR的常用方法包括生物化學(xué)及形態(tài)學(xué)兩大類；前者為對(duì)受體蛋白作定量測(cè)定，后者是觀察受體在腫瘤組織，包括細(xì)胞內(nèi)的分布及半定量測(cè)定。近年來(lái)在測(cè)定方面屢有改進(jìn)，如單克隆技術(shù)、高效液相及細(xì)胞流式計(jì)

2、數(shù)測(cè)定的應(yīng)用等尚未作為常規(guī)方法應(yīng)用。目前我國(guó)開展的生物化學(xué)方法有葡聚糖包裹活性炭液吸附法(DCC法)及蔗糖密度梯度超離心法(SDG法)；形態(tài)學(xué)方面有17FE細(xì)胞化學(xué)法及免疫組織化學(xué)法(熒光法及酶聯(lián)法)。由于各自條件不同，所用測(cè)定方法也不相同。為便于對(duì)資料進(jìn)行對(duì)比分析，本章介紹這些方法，以便統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。第一節(jié)生物化學(xué)法一、葡聚糖包裹活性炭液吸附法一、葡聚糖包裹活性炭液吸附法(DCC法)該類方法系通過(guò)3H標(biāo)記的雌激素與受體的特異性競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合來(lái)檢

3、測(cè)受體，包括DCC法（葡聚糖包裹活性炭液吸附法，DextranCoatedcoal）、SDG法（蔗糖密度梯度超離心法，SucroseDensityGraientUltracontrifugation）、HPA（羥基磷石灰分析法，Hydroxylapatite）、魚精蛋白沉淀法、瓊脂糖凝膠電泳法（AGE）等，以DCC法和SDG法為經(jīng)典方法。(一)測(cè)定原理在一定條件下，以氚標(biāo)記雌二醇([3H]E2)為配體，與受體結(jié)合，以葡聚糖包裹活性炭液吸

4、附游離的甾體激素，用液閃法測(cè)定與受體結(jié)合的標(biāo)記激素含量，表示受體的量。以激素與受體結(jié)合的動(dòng)力學(xué)方法計(jì)算受體含量。(二)測(cè)定方法(6)取上清液0.5μl置計(jì)數(shù)瓶?jī)?nèi)，加6μl甲苯閃爍液(4g的PPO和0.59的POPOP溶于1000μl甲苯)，2小時(shí)后以液體閃爍計(jì)數(shù)器測(cè)定其每分鐘計(jì)數(shù)。2結(jié)果處理：以各管的總結(jié)合量減去相應(yīng)管內(nèi)的非特異結(jié)合量，即為各管的特異結(jié)合量，以Scatd法作圖，便可求出Kd值和受體含量(圖101，2)。求得ER量為105

5、fmol／mg蛋白，Kd值為3.41010mol／L，將直線延伸達(dá)X軸，其交點(diǎn)即為其結(jié)合量。計(jì)算時(shí)應(yīng)考慮到機(jī)器效率、[3H]E2比活性及衰變等因素。結(jié)合量以fmol表示。用Lowry或考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定上清液內(nèi)蛋白質(zhì)含量，最終各乳腺癌組織內(nèi)ER含量以fmol／mg蛋白表示之。3DCC單點(diǎn)飽和法測(cè)定ER：由于用常規(guī)七點(diǎn)DCC法所需組織量多，操作、計(jì)算費(fèi)時(shí)，如同時(shí)測(cè)定ER及PR量，所需標(biāo)本量更多，易受標(biāo)本量限制而不能完整測(cè)定。單點(diǎn)DCC飽和法

6、比較省時(shí)，節(jié)約試劑，易被臨床接受作為常規(guī)測(cè)定方法。通常用[3H]E2反應(yīng)終濃度為5nmol／L即飽和濃度，測(cè)定方法同前。一般作4個(gè)重復(fù)管，即測(cè)4管總結(jié)合量及4管非特異結(jié)合量，總結(jié)合量的平均值減去非特異結(jié)合管的平均值即得特異結(jié)合量。4DCC法測(cè)定ER的注意事項(xiàng)：DCC法建立較早，已作為常規(guī)應(yīng)用方法，但其技術(shù)與設(shè)備要求較高，標(biāo)本量需1克以上，故對(duì)測(cè)定非切除標(biāo)本或腫塊較小的早期乳腺癌難以滿足需要。影響測(cè)定結(jié)果的因素有以下幾方面，應(yīng)予注意。(1