楊月紅_進(jìn)行性肌營(yíng)養(yǎng)不良癥（dmd）基因檢測(cè)

1、醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn),進(jìn)行性肌營(yíng)養(yǎng)不良癥（DMD）基因檢測(cè),第三次 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容,,,實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?通過(guò)對(duì)進(jìn)行性肌營(yíng)養(yǎng)不良癥基因檢的實(shí)驗(yàn)，掌握一種簡(jiǎn)便檢測(cè)基因缺失突變的方法,實(shí)驗(yàn)原理：通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR），結(jié)合瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)，檢測(cè)進(jìn)行性肌營(yíng)養(yǎng)不良癥(Duchenne muscular dystrophy，DMD)致病基因外顯子缺失突變。,瓊脂糖凝膠電泳技術(shù),,DMD是一組

2、原發(fā)于肌肉組織的遺傳病。DMD基因定位于Xq21.2-21.3之間，全長(zhǎng)2450 kb左右，是人體最大的基因，大約占X染色體的1%。有79個(gè)外顯子組成，編碼1個(gè)3685個(gè)氨基酸、分子量為427 kD的蛋白質(zhì)-----抗肌營(yíng)養(yǎng)不良蛋白(dystrophin)，這種蛋白具有穩(wěn)定細(xì)胞膜和細(xì)胞內(nèi)鈣調(diào)節(jié)的功能。,該基因有多種突變形式，60％是外顯子缺失突變，5％是重復(fù)突變，另35％可能是很小的DNA片段缺失或點(diǎn)突變。通常選擇DMD基因中9個(gè)缺失熱

3、點(diǎn)的外顯子擴(kuò)增，可檢出缺失突變中的90%。,,DMD基因4個(gè)外顯子的引物序列,本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)為擴(kuò)增DMD基因中4個(gè)外顯子，其中外顯子45 和48在中國(guó)患者中的檢出率分別為26%和48%。,實(shí)驗(yàn)步驟：,采血,,DNA抽提,PCR,電泳,觀察結(jié)果,,,,實(shí)驗(yàn)方法：多重PCR,雙蒸水 17.8 ?l 10xBuffer 2.5 ?l MgCl2

4、 2 ?l dNTPs 0.5 ?l Primer R+F (混合) 1.4 ?l DNA 模板 0.5 ?l Taq-DNA聚合酶 0.3 ?l 石蠟油 1滴,

5、,,10?l PCR產(chǎn)物,,,,,混勻,加樣,,,電泳(140V,2hr),,紫外燈下觀察,2 ?l 6*loading buffer,實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析,2. 人類染色體核型分析,●實(shí)驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^(guò)實(shí)驗(yàn)掌握染色體核型分析的常用方法以及Ｇ分帶的帶型特征，初步會(huì)識(shí)別Ｇ分帶人類染色體。,,核型 : 將一個(gè)細(xì)胞內(nèi)的染色體按照一定的順序排列起來(lái)構(gòu)成的圖象,實(shí)驗(yàn)原理,實(shí)驗(yàn)原理 ：,人類染色體Ｇ帶,,,1P33,1q32,人類染色體Ｇ帶,,,,,,,

6、,,49,xxxxx,,,,,,,,1 2 3 4 5 —————— A —————— —— B —— 6 7 8 9 10 11 1

7、2 ———————————— C ————————————— 13 14 15 16 17 18 19 20 ——— D ——— ——— E ———— —— F —— 21 22 — G — 性染色體,作 業(yè),核型：46，XY,