冰凍切片技術原理

1、冷凍切片制作技術,,一、冷凍切片的意義二、恒溫冷凍切片機的結構與功能三、冷凍切片組織的取材四、冷凍切片的制作方法五、冷凍切片的固定和染色六、冷凍切片的標準及染色的注意事項七、冷凍切片機的使用注意事項及日常維護,一、冷凍切片的意義,1.快速診斷：冷凍切片可稱之為病理科的急診工作，常用于臨床手術科室快速組織學診斷，特別是在手術進行當中取出病變組織，要求病理醫(yī)師在很短的時間內做出良、惡性的正確的診斷，為臨床醫(yī)師下一步的手術方案及治

2、療提供指導。2.顯示組織中脂質 脂肪染色和神經組織髓鞘的染色等3.顯示酶活性 主要應用于肌肉活檢的檢查4.免疫熒光的研究,二、恒溫冷凍切片機的結構與功能,1.結構：恒溫冷凍切片機主要由冷箱體及切片機構成，具有快速雙重制冷、自動除霜、自動消毒、負壓等功能。2.功能：利用物理降溫的方法將新鮮組織標本冷凍使其產生一定的硬度進行切片，與石蠟切片相比，冷凍切片不需要脫水處理，因此制片速度快，是為術中提供快速病理診斷的良好方法。LE

3、ICA CM1850,三、冷凍切片組織的取材,1.標本必須新鮮無固定，無液體浸泡；2.組織塊大小厚薄適宜；3.組織塊未受擠壓；4.盡量保持組織的原有形態(tài)；5.選擇好組織切面；6.保持組織的清潔；7.切除不需要的部分，遇有脂肪組織要剔除；8.組織內有異物一定要清除。,四、冷凍切片的制作方法,冷凍切片的重要環(huán)節(jié)是溫度。1.冷凍前將恒溫冷凍切片機的速凍頭溫度和箱內溫度調整到適宜的切片溫度，一般情況下為-25~-18℃。2.

4、在標本托上涂一層冷凍包埋劑OCT，然后將取材后的新鮮標本安放在標本冷凍托上并用OCT包埋劑覆蓋標本。3.組織較小或較薄，可先將OCT滴加在標本托上，凍成一個小冷臺，將組織放在小冷臺上，再覆蓋OCT冷凍，并用冷凍錘輕輕壓平。4.標本冷凍完成后將標本托固定在切片機的機頭上，調整機頭的位置使其恰好位于切片刀的后方。,四、冷凍切片的制作方法,5.以粗切削的方式進行標本的粗切削至暴露標本的最大平面，用毛筆清除機頭、標本托及刀片上的組織碎屑。

5、6.確認切片的厚度，一般6~10um不等，根據組織的不同可適當調整切片的厚薄。7.放下放卷板使其位置恰好與刀片的刀刃完全平行并略突出刀刃。8.以轉動大輪推進的方式進行切片，良好的切片將在放卷板下方形成一張完整平坦無褶的薄片，若切片略有彎曲可用小毛筆輕輕展平。9.打開放卷板，用載玻片平穩(wěn)的輕壓組織，使其平整的吸附到載玻片上。,四、冷凍切片的制作方法,10.也可不使用放卷板，用毛筆輕帶組織下方的白邊（OCT），隨機器的慢慢轉動，用毛筆

6、輕輕從上至下展開組織，使其平坦，組織齊全滿意時，用毛筆輕輕壓住切片的下方，右手拿載玻片輕輕平穩(wěn)地壓組織，使其平整地吸附在載玻片上，迅速放入固定液，進入染色程序。11.正確地調整使用冷凍切片機的放卷板是獲得平展完整冷凍切片的重要手段，放卷板的正確位置是，與切片刀的刀刃平行并略微突出于刀刃。,五、冷凍切片的固定和染色,一、冷凍切片的固定、固定液的選擇1.丙酮液2.10%中性福爾馬林緩沖液3.95%酒精4.乙醚、純酒精等量混合固定液

7、5.AF液6.AFA液可根據工作要求選擇適合于本單位的固定液,五、冷凍切片的固定和染色,二、冷凍切片染色1.冷凍切片應立即放入固定液中。2.固定1min左右，水洗。3.入蘇木精染色2min，水洗。4.1%鹽酸酒精分化數秒，水洗。（0.5%氫氧化銨水溶液返藍數秒，水洗）5.伊紅染液20s-1min，水洗。6.70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇逐級脫水。7.無水乙醇脫水2次。8.二甲苯透明兩次。9.中性樹膠封固。,六

8、、冷凍切片的標準及染色的注意事項,一、冷凍切片的標準1.操作正確2.切片完整3.厚薄均勻4.無褶無刀痕5.組織內無冰晶6.核質分明，染色適度7.組織結構清晰8.脫水透明潔凈9.封裱美觀10.時間迅速,六、冷凍切片的標準及染色的注意事項,二、冷凍切片染色的注意事項1.提倡使用新鮮蘇木精染液，每天過濾，防止沉渣及結晶的形成，保證高質量的冷凍切片以利診斷。2.室溫過低時，影響著色，可適當加溫促進染色。3.鹽酸酒精分化

9、應適度，顯微鏡下控制，否則易造成核著色不佳，染色質不清晰，影響診斷。,七、冷凍切片機的使用注意事項及日常維護,1.切片前，厚度應預先調制好，刀具提前安放好。2.刀的角度調好位置，并多備幾個冷凍托，以供速凍組織塊使用。3.切片時，觀察窗不可打開過大，以防溫度升高影響切片。4.每一例冷凍切片完成后都應及時清理冷凍組織碎屑，以防造成污染。5.切片污染是病理組織制片的大忌，在冷凍切片粗削后必須用毛筆清潔碎屑，以防其他組織碎屑沾染到正在進