幽門螺桿菌疫苗

1、幽門螺桿菌疫苗,杜薇 2017.08.31,目錄,01,背景,02,03,04,檢索方法,文獻內容,總結,第 1 部分,背景,幽門螺桿菌,“,背景,是一種螺旋形、微需氧、對生長條件要求十分苛刻的革蘭氏陰性桿菌。1983年首次從慢性活動性胃炎患者的胃粘膜活檢組織中分離成功，是目前所知能夠在人胃中生存的唯一微生物種類。幽門螺旋桿菌病包括由幽門螺旋桿菌感染引起的胃炎、消化道潰瘍、淋巴增生性胃淋巴瘤等。幽門螺旋桿菌病的不良預后是胃癌,

2、【陳述９】有效的幽門螺桿菌疫苗將是預防感染的最佳措施。證據(jù)質量：低。推薦強度：強。共識水平：100％。,第五次全國幽門螺桿菌感染處理共識報告 2017,第 2 部分,檢索方法,,,,,,PubMed 中國知網(wǎng),英文、中文各800+,Helicobacter pylori vaccine幽門螺桿菌疫苗,檢索方法,檢索工具,檢索結果,關鍵詞,第 3 部分,文獻內容,第一篇,知識拓展,與抗原同時或預先應用，能夠增強機體針對抗原的免疫應

3、答能力，或改變免疫反應類型的制劑,01,免疫佐劑定義,02,使用免疫佐劑的原因,可溶性純化蛋白質疫苗或蛋白質亞單位疫苗的免疫激活作用通常較弱，不足以刺激機體產生足夠的抗體，因此通常在疫苗制劑中加入佐劑。與單獨應用抗原相比，抗原與佐劑聯(lián)合應用所需的抗原量較少，機體產生的抗體量較多，并且還可以減輕免疫耐受,佐劑的作用機理,,03,1、改變抗原物理性狀，延緩抗原降解和排除，延長體內存留的時間，從而更有效的刺激免疫系統(tǒng)。2、 刺激單核巨噬細

4、胞增強其對抗原的處理和遞呈能力。3、 刺激淋巴細胞增生和分化，從而增強和擴大免疫應答的效應。4、改變抗體的產生類型以及產生遲發(fā)型變態(tài)反應。,04,理想佐劑的必備條件,1、安全，且無短期及長期的毒副作用。2、佐劑的化學成分和生物學形狀清楚，制備批間差異小且易于生產。3、與單獨使用抗原相比，佐劑與抗原聯(lián)用能刺激機體產生較強的免疫反應。4、用較少的免疫劑量即可產生效力。5、保證液體劑型疫苗在較低的濃度下即可刺激機體產生較強的免疫應

5、答。進入體內的佐劑可自行降解且易于從體內清除。6、價格低廉。,佐劑的分類,顆粒性佐劑 如氫氧化鋁佐劑 非顆粒性佐劑 如細胞因子本身具有免疫原性 如如百日咳桿菌、抗酸桿菌（結核分枝桿菌）以及革蘭陰性桿菌等本身不具有免疫原性 如氫氧化鋁、磷酸鈣、礦物油乳劑、表面活性劑等來源于植物的佐劑，如皂甙和多糖類提取物等來源于病原微生物的佐劑，如單磷脂、霍亂毒素以及CpG寡聚脫氧核苷酸等,05,常用佐劑,鋁鹽佐劑是一類含Al離子的無機鹽佐

6、劑，主要有氫氧化鋁膠和明礬。氫氧化鋁膠，又稱為鋁膠，由于其生產成本低廉，使用方便，毒性極低。鋁鹽佐劑是第一個被批準可用于人的佐劑。,1 鋁鹽佐劑,06,2 油性佐劑,弗氏佐劑( FA)、佐劑-65、白油Span佐劑 弗氏完全佐劑(FCA)是由低引力和低粘度的礦物油及乳化劑組成的一種貯藏性佐劑。弗氏不完全佐劑( FIA)是在不完全佐劑的基礎上加一定量的分枝桿菌而成。,3 微生物佐劑,短小棒狀桿菌(CP)　由CP經加熱或甲醛滅活制成

7、,為非特異性免疫增強劑,對機體毒性低,沒有明顯的副作用?？ń槊?BCG)　最常用的微生物佐劑之一原是用來預防結核病的疫苗,在預防兒童結核病方面功效顯著。胞壁酰二酞(MDP)及其衍生物　MDP的成分是N-乙酰胞壁酸-L-丙氨酸-D-異谷氨酰胺,有很強的佐劑活性。被認為是最有發(fā)展前途的佐劑之一。細菌脂多糖(LPS)　LPS可起到多克隆B細胞有絲分裂原的作用,也可促進巨噬細胞分泌單核因子。LPS由于具有毒性,所以不能直接成為人用疫苗的佐

8、劑單磷酰脂質A(MLA)　MLA是一種毒性較低的具有佐劑活性的脂多糖衍生物?；魜y毒素(CT)　霍亂毒素是由霍亂弧菌分泌的分子量為84KD的一種不耐熱腸毒素,增強弱免疫原的免疫原性。,4 表面活性劑類佐劑,4-1免疫刺激復合物（ISCOM）1 組成 抗原物質與由皂樹皮提取的一種糖苷Quil A及膽固醇按 1：1：1 混合后自發(fā)形成的一種具有較高免疫活性的脂質小泡。每個小泡直徑40 nm，約含10～12個分子的蛋白質2 作用方

9、式 ISCOM 能夠與抗原的疏水部分結合，從而將其親水部位暴露于免疫細胞，將抗原有效地遞呈給抗原提呈細胞，由于抗原遞呈細胞的內體小泡和胞質溶膠的雙重作用，含 ISCOM 的疫苗可以通過 MHC-Ⅰ和 MHC-Ⅱ兩種途徑將抗原遞呈給免疫系統(tǒng)，同時激活CD4+T細胞和CD8+T細胞4-2 脂質體1 結構 ：類似生物膜，一般由磷脂和膽固醇形成的雙分子層包被目標物形成的超微球狀制劑。2 特點：脂質體注入體內后能自然聚集到某些組織；

10、脂質體可以通過接觸、吸附、吞噬、融合和脂質交換等方式與細胞相互作用；脂質體可以增加所攜帶藥物對淋巴系統(tǒng)的指向性和靶組織的滯留性，延緩藥物釋放，提高療效；無毒并且還可以降低藥物對正常細胞的毒性,5 分子佐劑,5-1 細胞因子化學組成 多屬小分子多肽或糖蛋白，是由免疫細胞和某些非免疫細胞經刺激而合成、分泌的一類生物活性物質。特點 對Th細胞的分化起重要作用,能增強自然殺傷細胞細胞毒性T淋巴細胞的功能,還有誘導其它細胞因子的產生,

11、對機體的免疫應答具有廣泛的上調作用。分類：IL-2 一種重要的T細胞生長因子IL-12 由單核細胞和B細胞產生,具有多種生物活性, 是迄今所知誘導Th1型免疫應答的最主要的細胞因子。IL-18 是最近發(fā)現(xiàn)的鼠和人的細胞因子,可誘導Th1細胞和NK細胞高效分泌IFN-γ,促進T細胞增生,與IL-12產生協(xié)同作用等。IL-15 主要由單核—巨噬細胞產生,在哺乳動物一個主要的功能為調節(jié)NK細胞的發(fā)育與增殖,通過NK細胞產生

12、IL-15共刺激細胞因子從而調節(jié)巨噬細胞和NK細胞間的相互作用。IFN-γ 是一種有效的免疫佐劑,它能協(xié)同IL-2誘導LAK活性、增強抗原呈遞,5-2 CpG序列(CpG）,CpG序列 一類其序列大部分以非甲基化的胞嘧啶核苷酸和鳥嘌呤核苷酸(CpG)為基元的寡聚體,由于這種特征性序列可激活多種免疫效應細胞,故又被稱作免疫刺激DNA序列作用特點 可激活T細胞、B細胞、NK細胞等免疫活性細胞, 產生大量的多種細胞因子, 增強機體的特異

13、性和非特異性免疫效應。優(yōu)點 CpG引起的免疫反應以Th1型為主,因此可以很好的激發(fā)粘膜免疫反應雖然CpG-DNA具有安全、有效等優(yōu)點。,6 化學物質,左旋咪唑　主要作用于T淋巴細胞。此外它還有恢復周圍效應細胞的功能,既是免疫扶正劑又是免疫調節(jié)劑,不同免疫方法對重組幽門螺桿菌多靶點疫苗的免疫效果研究,重組幽門螺桿菌多靶點疫苗工程菌,,,,口服重組幽門螺桿菌疫苗Ⅰ、Ⅱ期臨床研究,鄒全明, 毛旭虎, 郭剛,等.,第二篇,題目,作者,雜志

14、,中華醫(yī)學會第七次全國消化病學術會議論文匯編(上冊). 2007,方法,血清檢驗結果,唾液檢驗結果,,糞便檢驗結果,,,結論,該疫苗在所試驗三種劑量下對人體均具有良好的安全性，未見明顯的毒副反應。試驗各組疫苗均能刺激人體產生較高的血清特異性IgG抗體、血清特異性總Ig抗體且持續(xù)時間較長，在全程免疫后兩月仍處于較高的水平。此疫苗具有良好的安全性和免疫原性，3次免疫優(yōu)于2次免疫,,,,Efficacy, safety, and immun

15、ogenicity of an oral recombinant Helicobacter pylori vaccine in children in China: a randomised, double-blind, placebo-controlled, phase 3 trial,Zeng M, Mao X H, Li J X, et al.,Lancet, 2015，影響因子：47.831,第三篇,題目,作者,雜志,實驗設計及

16、方法,江蘇省 4464名健康兒童 接受3次口服疫苗/安慰劑（隨機雙盲） 隨訪三年,藥品信息：疫苗是通過DNA重組技術開發(fā)的。每劑包含15mg尿素酶B亞單位和熱敏腸毒素B亞單位組成的融合蛋白接種時間：在第0、14和28天進行了口服疫苗接種接種方法：參與者禁食至少2小時，并在口服疫苗2分鐘前，喝80毫升的緩沖溶液，含2.8克碳酸氫鈉和1.1g的檸檬酸鈉。溶解在30毫升的25 - 30°C蒸餾水采集標本

17、：血樣、唾液采集時間：服藥前、第三次服藥后1個月、6個月、12個月（免疫分析）不良反應監(jiān)測：我們監(jiān)測參與者在每次服用后至少有30分鐘的不良反應。在接下來的3天里，參與者或他們的監(jiān)護人在日記中記錄了包括發(fā)燒、頭痛、眩暈和一些胃腸疾病在內的反應。記錄嚴重的不良反應。后期隨訪：我們在4、8、12個月的時間里拜訪了參與者，然后在第3次注射后的幾個月24和36個月，來評估幽門螺桿菌感染事件的發(fā)生。主要療效終點是接種疫苗后的12個月內發(fā)生幽

18、門螺桿菌感染。繼發(fā)療效終點為隨訪期間幽門螺桿菌感染的發(fā)生。免疫原性終點：抗體幾何平均滴度(GMT)，增長率(四倍的抗體滴度)，以及血清IgG和唾液IgA對尿素的幾何平均滴度增加。安全終點：在每組中被請求的不良反應和嚴重不良事件的發(fā)生率。,實驗設計及方法,結果,疫苗組,對照組,,,,疫苗組,安慰劑組,事件發(fā)生率 每年每百人,免疫效果,盡管免疫效果在第一年后減弱,但幽門螺桿疫苗顯著降低了感染事件的發(fā)生在整個研究期間。,(A)抗尿素酶B

19、亞單位特異性的血清IgG四倍增長率(B)唾液IgA四倍增長率,與安慰劑相比，幽門螺桿菌疫苗可明顯提高免疫應答特異性抗體濃度很高，第一年內沒有明顯減弱,安全性,腹脹,腹泄,胃痛,嘔吐,,第四篇,幽門螺桿菌疫苗的研究進展,1 Hp 疫苗的實驗研究Hp 疫苗有預防和控制感染的潛能，具有良好的開發(fā)前景，吸引國內外研究者致力于疫苗的研究。從早期的全菌疫苗到后來的基因工程疫苗，研究較多的應用于Hp 感染的疫苗主要有全菌疫苗、亞單位疫苗(

20、基因工程疫苗) 、核酸疫苗、聯(lián)合疫苗等。目前Hp 疫苗的研究大多處于臨床前階段，已進入臨床試驗的相對較少，實驗研究在尋求有效疫苗中發(fā)揮重要作用，為臨床試驗打下良好基礎。,,1. 1 全菌疫苗全菌疫苗是以全菌體作為免疫原接種 機體，產生高效的局部黏膜 免疫應答。1.2 亞單位疫苗亞單位疫苗可由培養(yǎng)Hp 并分離的抗原蛋白或利用基因工程生產重組的抗原蛋白制成。分離Hp 抗原蛋白操作復雜，費時費力，不易獲取，但通過基因工程獲得的抗原蛋白結

21、構簡單、成分清楚、安全性好和便于工業(yè)化大量生產，因而成為目前研究的重點。國內外學者已先后通過各種實驗證實尿素酶是一種有效的保護性抗原，因其表達于所有Hp 中，是Hp 定植于胃黏膜必需的物質，且具有高度保守序列，因此是研究最多、最理想的候選抗原; 尿素酶有A、B 兩個亞單位，其中尿素酶B 抗原性最強且有保護作用，是目前公認的首選抗原分子［6-7］此外，也有研究發(fā)現(xiàn)，Hp熱激蛋白［9］、空泡毒素與細胞毒素相關基因A 蛋白［10］、過氧化氫酶

22、［11］等蛋白抗原對小鼠動物模型有保護性免疫作用。,內容簡介,,1.3 核酸疫苗 核酸疫苗是指外源抗原基因直接轉移到真核表達載體內，通過宿主合成抗原蛋白，并誘導針對該抗原蛋白的免疫反應。核酸疫苗主要包括保護性抗原和真核表達載體，為一種新形式的疫苗，其在體內不復制、不整合。研究結果表明，Hp 核酸疫苗同樣具有較強的免疫原性和免疫保護性。然而，核酸疫苗經黏膜呈遞時易被核酸酶降解而失活，如何解決這個問題是核酸疫苗的一個重要問題。目

23、前，常采用帶正電的生物可降解材料包裹核酸疫苗來解決這一問題。包裹后形成的粒子在保護質粒不被核酸酶等降解的同時，還能更有效地促進免疫應答的發(fā)生。已有研究表明，殼聚糖納米粒作為基因呈遞載體顯示出良好的應用前景。1.4 聯(lián)合疫苗 目前技術分離的抗原的抗原性較弱，單一抗原疫苗產生的效果較低，而多價疫苗效果明顯高于單價疫苗。故目前認為應用Hp 多個亞單位或者功能肽段構建聯(lián)合疫苗，比單一成分構建疫苗具有更強的免疫保護性。,內容簡介,內

24、容簡介,2 Hp 疫苗的免疫機制研究,Hp 自然感染會誘導機體產生免疫應答，卻不能清除Hp，而導致患者的Hp 感染慢性化，其原因是Hp 可通過多種機制逃避宿主免疫應答，同時形成對Hp 感染的免疫耐受。研究證實，接種疫苗亦能夠誘導機體產生免疫應答，不僅可減少細菌負荷量，還能夠預防感染［9， 20］。目前認為Hp 自然感染誘導的免疫應答與接種疫苗誘導的免疫應答不同，疫苗有望根除Hp，但疫苗的免疫機制目前仍存在很多爭議，普遍認為體液免疫和細胞

25、免疫均參與抗Hp 反應。,內容簡介,3 免疫佐劑與呈遞系統(tǒng),3. 1 免疫佐劑抗Hp 感染中，黏膜免疫是令人滿意的，但由于食物與共生微生物的存在，人體的免疫系統(tǒng)可以耐受大部分蛋白質，同時Hp 抗原的免疫原性較低，單純用Hp 抗原免疫不能誘發(fā)足夠的抗Hp 感染的免疫應答，故需應用合適的佐劑來增強抗原的免疫原性，獲得理想的免疫效應。Hp 免疫佐劑最常用的是大腸埃希菌不耐熱腸毒素和霍亂毒素，這些佐劑在動物實驗中顯示良好的耐受性，但在人體不良

26、反應大，有學者應用Hp 溶菌產物與大腸埃希菌不耐熱腸毒素雙突變體( Ｒ192G/L211A) 免疫小鼠，獲得與霍亂毒素作為佐劑相似的保護性免疫，近年來，也有一些學者應用IL-2 為佐劑，發(fā)現(xiàn)其可提高免疫保護率［33-34］。也有研究發(fā)現(xiàn)，以氧化鋁為基礎的疫苗誘導小鼠可產生明顯的保護性免疫［35-36］。由于明礬已經批準用于人類，將此改進為可注射疫苗可能是抗Hp 感染的一個可行途徑。,3. 2 呈遞系統(tǒng) 呈遞系統(tǒng)的主要作用是

27、保護抗原，使之免受胃腸道或其他部位的酶降解，從而增強機體對抗原的免疫應答; 另外，呈遞系統(tǒng)還具有緩釋作用，能通過延長抗原的釋放時間來加強機體免疫應答［37］。 常用的呈遞系統(tǒng)有微粒、脂質體、凍干粉、復乳及凝膠、納米疫苗、減毒活菌、病毒體或病毒樣顆粒、殼聚糖及其衍生物等，但目前很少應用于非人類靈長類動物或臨床試驗。減毒活疫苗載體是目前研究比較多的一種，其不僅能發(fā)揮佐劑效應，還能作為呈遞系統(tǒng)呈遞抗原，具有良好的免疫及預防Hp

28、的作用，其中減毒沙門菌較常見，但活的減毒沙門菌在動物和人體內仍有一定的毒性，這限制了它的使用。菌蛻作為一種較為新穎的藥物遞送系統(tǒng)，日益受到人們的關注。 目前Hp 疫苗的呈遞系統(tǒng)仍存在很多問題，如吸收率低、殘留溶劑毒性大、制造工藝復雜、難以長期保存等問題，仍需尋求高效、安全、易推廣的遞送物質。,內容簡介,內容簡介,4 臨床應用研究,Hp 疫苗在動物實驗中取得了令人滿意的結果，但在許多臨床試驗中卻面臨著許多問題，效果往往不盡

29、人意。目前臨床試驗中，主要是佐劑的不良反應及抗原的免疫原性弱等問題。Malfertheiner 等［41］將含空泡毒素、細胞毒素相關基因A 蛋白、中性粒細胞激活蛋白的聯(lián)合疫苗加氫氧化鋁佐劑免疫57 例Hp 陰性志愿者，接種疫苗18 ～24 個月后檢測到記憶性抗體與細胞免疫反應，且不良反應輕微，提示氫氧化鋁在佐劑方面有較好的前景。然而，應用這種疫苗于Ⅲ期臨床試驗中的結果卻不盡如人意，約50% 的志愿者接種該疫苗12 周后，Hp 檢測陰性，

30、與安慰劑組相比，其保護率相似［2］。國內鄒全明教授等建立的“基因重組Hp 疫苗”已順利完成了世界第一個Hp 疫苗的Ⅲ期臨床研究，該疫苗是具有自主知識產權的一類新藥。,第 4 部分,總結,,藥品進展：關于幽門螺桿菌疫苗的研究一直在進行，歷時15年后，在2009年獲國家一類新藥證書，2015年完成了三期臨床試驗，免疫效果可達70%以上。2016年公司披露因資金緊張和技術不足遇到瓶頸，遲遲不能通過國家食藥總局補充注冊申請，仍無法獲批。接種時

31、間：在第0、14和28天進行了口服疫苗接種接種方法：禁食至少2小時，并在口服疫苗2分鐘前，喝80毫升的緩沖溶液（含2.8克碳酸氫鈉和1.1g的檸檬酸鈉）。溶解在30毫升的25 - 30°C蒸餾水。,參考文獻,[1]劉文忠, 謝勇, 陸紅,等. 第五次全國幽門螺桿菌感染處理共識報告[J]. 中國實用內科雜志, 2017, 22(6). [2]周永君, 楊靖, 祝捷,等. 不同免疫方法對重組幽門螺桿菌多靶點疫苗的免疫效果研究[

32、C]// 中國臨床微生物學大會暨微生物學與免疫學論壇. 2013. [3]鄒全明, 毛旭虎, 郭剛,等. 口服重組幽門螺桿菌疫苗Ⅰ、Ⅱ期臨床研究[C]// 中華醫(yī)學會第七次全國消化病學術會議論文匯編(上冊). 2007. [4]Zeng M, Mao X H, Li J X, et al. Efficacy, safety, and immunogenicity of an oral recombinant Helicobacter

33、 pylori vaccine in children in China: a randomised, double-blind, placebo-controlled, phase 3 trial.[J]. Lancet, 2015, 386(10002):1457-1464. [5]黃桂柳, 黃贊松, 周喜漢. 幽門螺桿菌疫苗的研究進展[J]. 醫(yī)學綜述, 2016, 22(5):866-870.,,謝謝,演示者 OfficePL