hplc-基礎知識ppt課件

1、HPLC 基礎知識,The Basic knowledge of HPLC急診組 楊旭峰,目錄,色譜分析法簡介色譜法的分類HPLC的特點及應用領域HPLC的分類HPLC相關的基本術語HPLC的相關理論,,HPLC的定性分析HPLC的定量分析HPLC儀器的組成 輸液泵 檢測器 色譜柱 進樣器 工作站,,P30的基本操作HPLC方法的建立液相色譜常見問題及其對策液相色譜容易出

2、現(xiàn)問題的部件儀器的維修和保養(yǎng),色譜分析法簡介,色譜法是一種重要的分離分析方法，它利用需被分離的各種物質(zhì)在互不相溶的兩相中分配系數(shù)的微小差異進行分離。當兩相相對移動時，使被測物質(zhì)在兩相之間進行反復多次分配，使原來微小的差異累加產(chǎn)生了很大的效果，形成差速遷移，使各組分在柱內(nèi)移動的同時逐漸分離，以達到分離，分析及測定其各種物理化學參數(shù)的目的。,色譜的由來,俄國植物學家茨維特（Tswett）1906年，他將從植物色素提取的石油醚提取液倒入一根

3、裝有碳酸鈣的玻璃管頂端，然后用石油醚淋洗，結果使不同色素得到分離，在管內(nèi)出現(xiàn)色帶，色譜一詞由此而來。,色譜法的分類,1.按兩相狀態(tài)分類2.按分離機理分類3.按固定相得外型分類,1.按兩相狀態(tài)分類,氣體為流動相：氣相色譜（GC） 固定相是固體吸附劑：氣固色譜（GSC） 固定相是固定液（附著在惰性載體上的一薄層有機化合物液體）：氣液色譜（GLC）液體為流動相：液相色譜（LC） 液固色譜（LSC） 液液色

4、譜（LLC）,,隨著色譜分析的發(fā)展，通過化學反應將固定液鍵合到載體表面，這種化學鍵合固定相的色譜稱為：化學鍵合相色譜（CBPC）超臨界流體為流動相的色譜為超臨界流體色譜（SFC）,2.按分離機理分類,吸附色譜法：利用組分在吸附劑（固定相）上的吸附能力強弱不同而得以分離的方法。分配色譜法：利用組分在固定液（固定相）中溶解度不同而達到分離的方法。離子交換色譜法：利用組分在離子交換劑（固定相）上的親和力大小不同而達到分離的方法。凝膠色

5、譜：利用分子大小同，在多孔固定相中的選擇滲透而達到分離的方法。,,親和色譜法：利用不同組分與固定相（固定化分子）的高專屬性親和力進行分離的技術。常用于蛋白質(zhì)的分離。,3.按固定相的外型分類,柱色譜：固定相裝于柱內(nèi)平板色譜：固定相呈平板狀，又可分為薄層色譜和紙色譜,4.按照展開程序分類,按照展開程序的不同，分為：洗脫法、頂替法和迎頭法洗脫法（沖洗法）：將樣本加到色譜柱頭上用吸附或溶解能力比樣本組分弱得多的氣體或液體作沖洗劑各組分

6、被沖洗劑帶出的向后次序不同而分離，流出曲線如后圖：,,,這種方法能使樣本各組分獲得良好的分離，色譜峰清晰，此外，除去沖洗劑后，可獲得純度較高的物質(zhì)。目前這種方法是色譜法中最常用的一種方法。,A,B,,頂替法：將樣本加到色譜柱頭后，在惰性流動相中加入對固定相得吸附或溶解能力比所有樣本組分強的物質(zhì)為頂替劑（或直接用頂替劑作流動相），通過色譜柱，將各組分按吸附或溶解能力的強弱順序，依次頂替出固定相。 很明顯，吸附或溶解能力最弱得組分