免疫球蛋白的檢測與臨床應用

1、免疫球蛋白的檢測與臨床應用,檢驗科 王濤,免疫球蛋白（Ig）是由漿細胞合成和分泌的一組具有抗體活性的蛋白質(zhì)。由兩條重鏈和兩條輕鏈通過二硫鍵連接而構(gòu)成。重鏈分為IgG,IgA,IgM,IgD,IgE.輕鏈分為κ(kappa),λ(Lambda)兩個類別,什么是免疫球蛋白？,免疫球蛋白的結(jié)構(gòu),血清免疫球蛋白IgG,IgA,IgM,定量測定方法一般有單向環(huán)狀免疫擴散法，火箭免疫電泳法，ELISA,免疫比濁法，放射免疫分析法等，但

2、臨床常用單向環(huán)狀免疫擴散法和免疫比濁法來測定血清免疫球蛋白含量。,檢測方法,作為血清中最主要的抗體成分，約占人體血清中總免疫球蛋白含量的75%。是唯一能通過胎盤的Ig，IgG是血液和細胞外液中的主要抗體，也是機體再次免疫應答的主要抗體，大多數(shù)抗感染抗體與自身抗體都為IgG 類。16歲以上成年人IgG臨床參考范圍為：6.0~16.0g/L,IgG,在正常人血清中的含量僅次于IgG，占血清免疫球蛋白含量的10～20%。新生兒血清中無IgA

3、抗體，但可從母乳中獲得分泌型IgA。分為血清型IgA和分泌型IgA：其中血清型IgA含量占總IgA的85%左右，雖然血清型IgA雖有IgG和IgM的某些功能，但在血清中并不顯示重要的免疫功能。分泌型IgA存在于分泌液中，如唾液、淚液、初乳、鼻和支氣管分泌液、胃腸液、尿液、汗液等。機體粘膜局部抗感染免疫的主要抗體。故又稱粘膜局部抗體。16歲以上成年人IgA臨床參考范圍為：0.76~3.9g/L,IgA,IgM是初次體液免疫應答

4、中最早出現(xiàn)的抗體，是機體抗感染的先頭部隊，血清中檢出IgM，提示新近發(fā)生感染，可用于感染的早期診斷。分泌型IgM為五聚體，是分子量最大的Ig，沉降系數(shù)為19S，稱為巨球蛋白，一般不能通過血管壁，主要存在于血液中。16歲以上成年人IgG臨床參考范圍為：0.4~3.45g/L,IgM,。,慢性肝臟疾病如慢性活動性肝炎，原發(fā)性膽汁性肝硬化，隱匿性肝硬化患者血清中可見三種免疫球蛋白均升高。慢性細菌感染如慢性支氣管炎，肺結(jié)核，血IgG可升高

5、，宮內(nèi)感染時臍血或出生的新生兒血清中IgM含量可增高。,IgG 、IgA、IgM均升高,有先天性和獲得性兩類，先天性低免疫球蛋白血癥，主要見于體液免疫缺陷病和聯(lián)合免疫缺陷病。另一種情況是3種Ig中缺1種或2種，如IgA缺乏患者，易發(fā)生反復呼吸道感染；IgG缺乏患者，易發(fā)生化膿性感染；IgM缺乏患者，易發(fā)生革蘭陰性菌敗血癥。獲得性低Ig血癥，血清中IgG常小于5 g/ L，引起原因較多，如大量蛋白流失的疾病（剝脫性皮炎、腸淋巴管擴張癥和腎

6、病綜合征）、淋巴系統(tǒng)腫瘤（淋巴肉瘤、霍奇金淋巴瘤）、中毒性骨髓疾病、長期使用免疫抑制劑等。,IgG、IgA、IgM降低,正常人血清中IgD含量很低，僅占血清免疫球蛋白總量的0.2%。IgD可在個體發(fā)育的任何時間產(chǎn)生，半衰期2.8天。血清IgD的生物學功能尚不清楚，膜結(jié)合型IgD（mIgD）構(gòu)成BCR，是B細胞分化發(fā)育成熟的標志，未成熟的B細胞僅表達mIgM，成熟B細胞可同時表達mIgM和mIgD，稱為初始B細胞（native B cel

7、l）；活化的B細胞或記憶B細胞其表面的mIgD逐漸消失。IgE是正常人血清中含量最少的免疫球蛋白，主要由黏膜下淋巴組織中的漿細胞分泌。其重要特征為糖含量高達12%。IgE為親細胞抗體，可引起I型超敏反應。此外，IgE可能與機體抗寄生蟲免疫有關。,血清IgD和IgE,（一）測定方法 IgD的測定方法有放射免疫分析法，乳膠顆粒免疫比濁分析法、酶聯(lián)免疫吸附試驗。在臨床用得最多的是酶聯(lián)免疫吸附試驗測定IgD。（二）臨床意義 目前IgD

8、的生物功能尚未完全闡明，血清中IgD升高主要見于妊娠末期，IgD型骨髓瘤，甲狀腺炎和大量吸煙。IgD降低見于原發(fā)性無丙種球蛋白血癥、肺硅沉著?。ㄎ危?、細胞毒藥物治療后。,IgD測定及臨床意義,（一）測定方法1.總IgE的測定方法 有化學發(fā)光免疫分析法、放射免疫分析法、乳膠顆粒免疫比濁法及酶聯(lián)免疫吸附試驗等。在臨床上用化學發(fā)光免疫分析法和酶聯(lián)免疫吸附試驗測定總IgE較為常見。2.特異性IgE的檢測方法 主要有免疫斑點法和

9、酶聯(lián)免疫吸附試驗。商品化的試劑盒提供了多種特異性的變應原，包括食物、吸入物以及藥物過敏原，利用這些特異性變應原就可以檢測血清中特異性IgE。,IgE測定及臨床意義,（二）臨床意義1.I型變態(tài)反應性疾病，如特發(fā)性哮喘、特發(fā)性皮炎、過敏性鼻炎等IgE常升高。2.非變態(tài)反應性疾病，如IgE骨髓瘤、寄生蟲感染等IgE升高。3.急性或慢性肝炎、SLE、類風濕關節(jié)炎等疾病IgE可升高。4. IgE降低見于原發(fā)性無丙種球蛋白血癥、腫瘤及化療

10、藥物應用后。,IgE測定及臨床意義,與重鏈結(jié)合成免疫球蛋白的輕鏈稱為結(jié)合輕鏈，未與重鏈結(jié)合的輕鏈稱為游離輕鏈。游離輕鏈的量最終取決于B細胞的合成分泌與腎臟清除的動態(tài)平衡結(jié)果，臨床上多種疾病都可導致血清中游離輕鏈濃度異常，例如：免疫抑制，自身免疫，腎臟清除率降低及漿細胞病等。,什么是游離輕鏈?,游離輕鏈通過腎小球濾過而從血液中快速清除，然后被近端腎小管重吸收和分解，因此游離輕鏈的檢測可以實時評估病情進展，研究表明大量的游離輕鏈可以被腎

11、臟吸收，所以只有非常少的游離輕鏈逃過近端腎小管的重吸收，在正常的尿中含有極少量的游離輕鏈。,本周氏蛋白血清蛋白電泳免疫固定電泳免疫比濁法檢測游離輕鏈,游離輕鏈的檢測,高敏感性：可達到5-10mg/L高特于性高檢測速率定量檢測：可同時檢測κ型和λ型輕鏈的水平以及兩者的比值，有利于鑒別診斷和監(jiān)測病情的變化,免疫比濁法檢測,Κ型游離輕鏈或λ型游離輕鏈中某一個指標濃度異常增高和比值異常，常提示有單克隆類疾病，如多發(fā)性骨髓

12、瘤，巨球蛋白血癥，原發(fā)性淀粉樣變性，輕鏈沉積病等。Κ型或λ型游離輕鏈同時增高，可能原因有感染，腎功能受損或結(jié)締組織類疾病。,多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma, MM)是一種漿細胞單克隆惡性增生性疾病, 其特征為由晚期B細胞分化的腫瘤性漿細胞分泌單克隆免疫球蛋白或重鏈, 并伴有溶骨性病變和/或骨質(zhì)疏松。,多發(fā)性骨髓瘤,血常規(guī) 大多數(shù)MM患者血紅蛋白(hemoglobin, Hb)含量和紅細胞(red blo

13、od cell, RBC)計數(shù)會有一定范圍的降低, 大多數(shù)患者表現(xiàn)為正細胞正色素性貧血, 也有小部分出現(xiàn)小細胞低色素性貧血癥狀, 貧血程度會隨著病情的進展逐漸加重。白細胞計數(shù)多正常, 但也可增高或降低。血小板計數(shù)早期正常或增高, 病情進展時可減少。外周血涂片成熟RBC的形態(tài)大致正常, 常見RBC重疊排列呈緡線狀。,多發(fā)性骨髓瘤實驗室常規(guī)檢查項目,白蛋白/球蛋白比值(A/G) 在疾病初期, 大部分MM患者的球蛋白增高, 直

14、接導致總蛋白明顯增加, 白蛋白水平正?；蚪档?。隨著病情的進展, 肝細胞合成功能降低導致白蛋白生成降低, 且MM患者蛋白丟失增加, 攝入減少, 也會使白蛋白降低, 導致A/G倒置。,多發(fā)性骨髓瘤實驗室常規(guī)檢查項目,腎功能檢測 MM患者腎臟損害的發(fā)生由多種因素導致, 其中骨髓瘤細胞所分泌的單克隆免疫球蛋白輕鏈在腎臟的沉積是導致MM腎病的主要原因。實驗室檢查特征表現(xiàn)為血尿素氮及肌酐水平增高、肌酐清除率降低等, 晚期甚至可出現(xiàn)尿毒

15、癥。,多發(fā)性骨髓瘤實驗室常規(guī)檢查項目,免疫球蛋白檢測 IgG型MM患者64%~80%出現(xiàn)IgG含量增高而IgA和IgM 含量降低, IgA型MM患者只有58%出現(xiàn)IgA含量增高, IgG和IgM 含量減低的占75%~100%; 100%IgM型MM患者的IgM 含量都增高, 其它2種免疫球蛋白降低的占61%~75%; 71%~100%的輕鏈型MM患者IgA、IgG、IgM含量都部分降低。在對MM的免疫球蛋白含量的檢測中,