生物科學畢業(yè)論文曼氏無針烏賊兩種顏色受精卵卵膜營養(yǎng)成分對比分析

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文</b></p><p><b>　?。?0 屆）</b></p><p>　　曼氏無針烏賊兩種顏色受精卵卵膜營養(yǎng)成分對比分析</p><p>　　所在學院 </p><p>　　專業(yè)班級

2、 生物科學 </p><p>　　學生姓名 學號 </p><p>　　指導教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p><b>　　目錄</

3、b></p><p>　　摘要錯誤!未定義書簽。</p><p>　　Abstract錯誤!未定義書簽。</p><p><b>　　引言1</b></p><p><b>　　1材料與方法3</b></p><p><b>　　1.1樣品3&l

4、t;/b></p><p>　　1.2實驗原理3</p><p>　　1.2.1水分的測定3</p><p>　　1.2.2總灰分的測定3</p><p>　　1.2.3脂肪含量的測定3</p><p>　　1.2.4蛋白質含量的測定4</p><p>　　1.2.5蛋白質的氨

5、基酸及微量元素測定5</p><p>　　1.3 試劑及儀器5</p><p><b>　　1.3.1試劑5</b></p><p><b>　　1.3.2儀器6</b></p><p><b>　　1.4方法步驟7</b></p><p>　

6、　1.4.1水分的測定7</p><p>　　1.4.2灰分的測定8</p><p>　　1.4.3粗脂肪的測定9</p><p>　　1.4.4粗蛋白的測定9</p><p>　　1.4.5氨基酸及微量元素測定10</p><p><b>　　2實驗結果12</b></p>

7、;<p>　　2.1檢測環(huán)境參數(shù)12</p><p>　　2.2檢測結果12</p><p>　　2.2.1水分側定數(shù)據(jù)12</p><p>　　2.2.2灰分數(shù)據(jù)12</p><p>　　2.2.3粗脂肪測定數(shù)據(jù)13</p><p>　　2.2.4蛋白質數(shù)據(jù)14</p><

8、;p>　　2.2.5氨基酸及微量元素數(shù)據(jù)14</p><p>　　3結果分析與討論16</p><p><b>　　3.1水分16</b></p><p><b>　　3.2灰分16</b></p><p><b>　　3.3粗脂肪16</b></p>

9、;<p><b>　　3.4粗蛋白16</b></p><p><b>　　3.5氨基酸16</b></p><p>　　3.6微量元素17</p><p>　　3.7本章小結17</p><p><b>　　參考文獻19</b></p>

10、<p>　　致謝錯誤!未定義書簽。</p><p><b>　　摘要</b></p><p>　　[摘要]本實驗通過干燥法、550℃高溫灼燒法、索氏提取法、凱氏定氮法和儀器分析對曼氏無針烏賊（Sepiella maindroni）兩種顏色受精卵卵膜中的水分、灰分、粗蛋白、粗脂肪及部分微量元素等成分進行了分析。結果表明：曼氏無針烏賊黑色卵膜含水量為92.27

11、%，灰分含量為1.71%，粗脂肪含量為0.32%，蛋白質含量為5.12%；曼氏無針烏賊白化卵膜含水量為92.34%，灰分含量為1.76%，粗脂肪含量為0.34%，蛋白質含量為5.28%；曼氏無針烏賊卵膜蛋白質中含有17種氨基酸，其中黑色卵膜含天冬氨酸（Asp），蘇氨酸（THR）和異亮氨酸（ILR)的質量分數(shù)較高，分別占0.50 %、0.46 %和0.43%。而白色卵膜中谷氨酸（GLU），天門冬氨酸（ASP）和亮氨酸（LEU）所占比例最高

12、，分別為14.32%、10.65%和7.95%。黑色卵膜微量元素中鎂、鉀、鈣的含量相對較高，含量分別為1100mg∕kg、367mg∕kg、528mg∕kg；其中硒的含量最低為0.23mg∕kg。白色卵膜微量元素中磷、鈣、鎂含量相對較高，含量分別為1423.2mg∕kg、313.2mg∕kg、241</p><p>　　[關鍵詞] 曼氏無針烏賊；卵膜；營養(yǎng)成分</p><p><b

13、>　　Abstract</b></p><p>　　[abstract]By using oven drying method, 550℃ high temperature ignition method, solex method, Kjeldahl method and instrumental analysis, the contents of water, ash, crude prot

14、ein, crude fat and trace elements in two color types of egg membrane were analysised in Sepiella.maindroni.The results showed that in the black egg membrane of S.maindroni, the contents of water, ash, Fatty acids, protei

15、n were correspondingly 92.27 %, 1.71 %, 0.23 % and 5.12 %; while in the white egg membrane, the correspondi</p><p>　　[Key words] Sepiella maindroni;egg membrane;nutritional components </p><p>&l

16、t;b>　　引言</b></p><p>　　曼氏無針烏賊(Sepiella maindroni de Rochebruns),屬軟體動物門(Mollusca)、頭足綱(Cephalopoda)、烏賊目(Sepioidea)、烏賊科(Sepiidae)動物，為中型烏賊。個體較金烏賊小，一般胴體長15cm。眼部橢圓形，后部端圓，長度為寬度的2倍。眼部后面有一脈孔，常流出近紅色的腥臭腺體。肉鰭前段狹

17、窄，向后部漸寬，位于胸部兩側全緣，末端分離。腕5對，4對長度相近，第4對腕較其他腕長。各腕吸盤大小也相近。其膠質環(huán)外緣具尖錐形小齒。觸腕一般超過胭長，穗狹小。眼背白花斑明顯。石灰質內骨長橢圓形，長度約為寬度的3倍，角質緣發(fā)達，后端無骨針[1]。曼氏無針烏賊的可食部分約占總體的92%。其肉潔白如玉，具有鮮、嫩、脆的特點，營養(yǎng)豐富每百克肉含蛋白質13g、脂肪0.7g以及豐富的鈣、磷、鐵。除鮮食外，還可加工制成罐頭食品或干制品。烏賊的干制品南

18、方叫螟蚨鲞，北方叫墨魚干，雄性生殖腺干品叫烏魚穗，雌性纏卵腺干品叫烏魚蛋，均為海味佳品[2]，深受百姓喜愛。其不僅肉味鮮美,營養(yǎng)豐富,而且還具有重要的藥用價值。烏賊骨即中藥海螵蛸，具有藥用價值。我國著名的“墨</p><p>　　Correia et al，2005)。曼氏無針烏賊曾是我國傳統(tǒng)的四大海產(chǎn)之一,浙江歷史上最高年產(chǎn)量曾達6萬多噸,占海洋捕撈產(chǎn)量的9.3%。20世紀70年代末以來,產(chǎn)量連續(xù)降至最低水平,

19、占全省海洋捕撈產(chǎn)量的比重從60年代的9.3%降至3.0%以下(烏賊資源增殖研究課題組,1986)。80年代中后期，浙江沿海漁場曼氏無針烏賊已經(jīng)無法形成漁汛，并逐步絕跡。近年來，曼氏無針烏賊在市場上供不應求，其市場價格也一路攀升，前景看好。修復曼氏無針烏賊資源，逐步恢復我國四大海產(chǎn)，是廣大消費者盼望已久的迫切要求，也是海洋漁業(yè)工作者的歷史使命。</p><p>　　每年春夏之際，烏賊由深水游向淺水內灣燈產(chǎn)卵，此謂生

20、殖徊游。產(chǎn)卵后的烏賊在近海大批死亡。我國烏賊種類較多，洄游明顯的為曼氏無針烏賊（Sepiella maindroni），盛產(chǎn)于浙江南部沿海及福建沿海；臺灣槍烏賊（Loligo formosana），分布于臺灣海峽以南海區(qū)，汕頭外海及北部灣為產(chǎn)卵場所。烏賊喜歡把卵產(chǎn)在海藻或木片上面，像一串串葡萄似的掛在上面。因此，沿海的漁民常把樹枝之類的東西捆成一束一束的，投入海中，引誘烏賊來產(chǎn)卵，待成群的烏賊游來產(chǎn)卵時，再張網(wǎng)捕撈，獲益甚厚。據(jù)青島附近

21、情況，產(chǎn)卵時適宜溫度為15℃～20℃，鹽分為30%以上。產(chǎn)卵前雌雄交配，即雄性以莖化腕將精莢送入雌體外套腔中，精莢破裂，釋放出里面的精子，精卵在外套腔內受精。交配后不久，雌性即排出受精卵，圓形，一端稍尖，長徑10mm許，成串聚積一起，表面黑色，粘于外物上俗稱“海葡萄”。烏賊卵含大量卵黃，屬端黃卵。經(jīng)不完全卵裂（盤式卵裂）以外包法形成原腸胚，直接發(fā)育。孵化出幼體與成體相似。</p><p>　　卵膜是指包繞在發(fā)育中

22、卵母細胞、成熟卵和發(fā)育中胚胎外面的單層、雙層和三層被膜,即初級卵膜、次級卵膜和三級卵膜。初級卵膜源于卵母細胞，次級卵膜和三級卵膜分別由濾泡細胞和輸卵管分泌形成。</p><p>　　為迅速恢復我國的曼氏無針烏賊資源，以人工增殖和養(yǎng)殖為手段的資源修復工作已迅速在我國部分省市展開。曼氏無針烏賊人工育苗，是目前急需了解的問題。大量研究明，人工養(yǎng)殖雖然可以快速增加漁業(yè)產(chǎn)量，提高生產(chǎn)效率，而曼氏無針烏賊人工育苗，對于曼氏無

23、針烏賊養(yǎng)殖開發(fā)而言是極其關鍵的一環(huán)，在人工養(yǎng)殖的過程中發(fā)現(xiàn)養(yǎng)殖幾代后的曼氏無針烏賊出現(xiàn)白化卵，使得孵化率下降。但到目前為止，我國還從未對曼氏無針烏賊卵膜的營養(yǎng)成分做過相應的系統(tǒng)全面的研究。本文擬采用生化測定方法，對曼氏無針烏賊正常的受精卵卵膜和白化的受精卵卵膜中的營養(yǎng)成分構成進行研究，希望通過研究更清楚全面地了解曼氏無針烏賊卵膜的營養(yǎng)成分構成，減少白化卵的產(chǎn)生，為以后的人工育苗做出一些貢獻。</p><p>&l

24、t;b>　　材料與方法</b></p><p><b>　　樣品</b></p><p>　　檢測樣品曼氏無針烏賊卵膜，采自浙江舟山大海洋科技有限公司秀山養(yǎng)殖基地，采樣時間為2010年4月20號。</p><p><b>　　實驗原理</b></p><p>　　1.2.1水分的測

25、定</p><p>　　直接干燥法:基于曼氏無針烏賊卵膜中的水分受熱以后，產(chǎn)生的蒸汽壓高于空氣在電熱干嫌箱中的分壓，使曼氏無針烏賊卵膜中的水分蒸發(fā)出來，同時，由于不斷的加熱和排走水蒸汽，而達到完全干燥的目的，曼氏無針烏賊卵膜干燥的速度取決于這個壓差的大小。</p><p>　　1.2.2總灰分的測定</p><p>　　把一定量的樣品經(jīng)炭化后放入高溫爐內灼燒，使有機

26、物質被氧化分解，以二氧化碳、氮的氧化物及水等形式逸出，而無機物質以硫酸鹽、磷酸鹽、碳酸鹽、氯化物等無機鹽和金屬氧化物的形式殘留下來，這些殘留物即為灰分，稱量殘留物的重量即可計算出樣品中總灰分的含量。</p><p>　　1.2.3脂肪含量的測定</p><p>　　將經(jīng)前處理而分散且干燥的樣品用無水乙醚或者石油醚等溶劑回流提取，使樣品中的脂肪進入溶劑中，回收溶劑后所得到的殘留物，即為脂肪（

27、或粗脂肪）。</p><p>　　一般食品用有機溶劑浸提，揮干有機溶劑后稱得的重量主要是游離脂肪，此外還含有磷脂、色素、樹脂、蠟狀物、揮發(fā)油、糖脂等物質，所以用索氏提取法測得的脂肪，也稱粗脂肪。</p><p>　　此法適用于脂類含量較高結合態(tài)的脂類含量較少，能烘干磨細，不宜稀釋結塊的樣品的測定。食品中的游離脂肪一般都能直接被乙醚、石油醚等有機溶劑抽提，而結合態(tài)脂肪不能直接被乙醚、石油醚提

28、取，需要在一定的條件下進行水解等處理，使之轉化成游離脂肪后方能提取，故索氏抽提法測得的知識游離態(tài)脂肪，而結合態(tài)脂肪測不出來。</p><p>　　1.2.4蛋白質含量的測定</p><p>　　樣品與濃硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質分解，其中碳和氫被氧化成二氧化碳和水，而樣品中的有機氮轉換成氨與硫酸結合生成硫酸銨。然后加堿蒸餾，使氨逸出用硼酸吸收后再以標準鹽酸或硫酸滴定。根據(jù)標準酸消耗

29、量可計算出蛋白質的含量。</p><p>　　樣品消化：消化反應方程式： </p><p>　　2NH2(CH2)2COOH+13H2SO4 =(NH4)2S04 + 6C02+12S02+16H20</p><p>　　濃硫酸具有脫水性，使有機物脫水后被炭化為碳、氫、氮。濃硫酸又有氧化性，將有機物炭化后的碳化為二氧化碳，硫酸則被還原成二氧化硫：</p>

30、;<p>　　2 H2SO4+C=2S02+2H20+CO2↑</p><p>　　二氧化硫使氮還原為氨，本身則被氧化為三氧化硫，氨隨之與硫酸作用生成硫酸銨留在酸性溶液中：</p><p>　　K2SO4﹢2NH3 = (NH4)2SO4</p><p>　　在消化反應中，為了加速蛋白質的分解，縮短消化時間，常加入下列物質：</p>

31、<p>　　1)硫酸鉀 加入硫酸鉀可以提高溶液的沸點而加快有機物分解，它與硫酸作用生成硫酸氫鉀可提高反應溫度，一般純硫酸的沸點在340℃左右，而添加硫酸鉀后，可使溫度提高至400℃以上，原因主要在于隨著消化過程中硫酸不斷地被分解、水分不斷逸出而使硫酸硫酸鉀濃度增大，故沸點升高，其反應式如下：</p><p>　　K2SO4+ H2SO4=2KHSO4</p><p>　　2

32、KHSO4=K2SO4+H2O↑十+SO 3</p><p>　　但硫酸鉀加入量不能太大，否則消化體系溫度過高，又會引起已生成的銨鹽發(fā)生熱分解放出氨而造成損失：</p><p>　　(NH4)2SO4=NH3↑十(NH4)HSO4</p><p>　　2(NH4)HSO4→2NH3↑+2SO3↑十2H2O</p><p>　　除硫酸鉀外，也可

33、以加入硫酸鈉、氯化鉀等鹽類來提高沸點，但效果不如硫酸鉀。</p><p>　　2)硫酸銅CuS04 硫酸銅起催化劑的作用。凱氏定氮法中可用的催化劑種類很多，除硫酸銅外，還有氧化汞、汞、硒粉、二氧化鈦等，但考慮到效果、價格及環(huán)境污染等多種因素，應用最廣泛的是硫酸銅、使用時常加入少量過氧化氫、次氯酸鉀等作為氧化劑以加速有機物氧化，硫酸銅的作用機理如下所示：</p><p>　　2Cu SO4

34、→Cu SO4+ SO2↑+O2</p><p>　　C+2CuSO4→Cu2 SO4+S02↑ +CO2↑</p><p>　　Cu2SO+2H2SO4→2CuSO4+2H2O+SO2↑</p><p>　　此反應不斷進行，待有機物全部被消化完后，不再有硫酸亞銅生成，溶液呈現(xiàn)清澈的藍綠色。故硫酸銅除起催化劑的作用外，還可指示消化終點的到達，以及下一步蒸餾時作為堿性

35、反應的指示劑。</p><p>　　⑴蒸餾：在消化完全的樣品溶液中加入濃氫氧化鈉使呈堿性，加熱蒸餾即可釋放出氨氣反應方程式如下：</p><p>　　2NaOH+(NH4) SO4=2NH3↑+ Na2SO4+2H2O</p><p>　?、莆张c滴定：加熱蒸餾所放出氨可甩硼酸溶液進行吸收，待吸收完全后，再用鹽酸標準溶液滴定，因硼酸呈微弱酸性，用酸滴定不影響指示劑的

36、變色反應，但它有吸收氨的作用，吸收及滴定反應方程式如下：</p><p>　　2NH3+4H3BO3=(NH4) 2B4O7+5H2O</p><p>　　(NH4) 2B4O7+5H2O+2HCl=2NH4C1+4H3BO3</p><p>　　蒸餾釋放出來的氨，也可以采用硫酸或鹽酸標準溶液吸收，然后再用氫氧化鈉標準溶液反滴定吸收液中過剩的硫酸或鹽酸，計算出總氮量

37、。</p><p>　　1.2.5蛋白質的氨基酸及微量元素測定</p><p>　　基酸和微量元素鉀、 鈣、 納、 鎂、磷、鐵、銅、鋅、錳、硒的測定委托上海譜尼測試技術有限公司(Pony Testing International Group www.ponytesting.com)和浙江大學飼料研究所測定。</p><p>　　參照標準 GB/T 50

38、09.124-2003 GB/T 5009.93-2003 </p><p>　　GB/T 5009.91-2003 GB/T 5009.90-2003 GB/T 5009.13-2003 GB/T 5009.87-2003</p><p><b>　　1.3 試劑及儀器</b>

39、;</p><p><b>　　1.3.1試劑</b></p><p>　　(1)1：4鹽酸溶液</p><p>　　(2)0.5％三氯化鐵溶液和等量藍墨水的混合液</p><p>　　(3)6mol/L硝酸</p><p>　　(4)36％過氧化氫</p><p>　　(

40、5)辛醇或純植物油</p><p>　　(6)無水乙醚或石油醚</p><p>　　(7)海砂(同水分測定)</p><p><b>　　(8)濃硫酸，</b></p><p><b>　　(9)硫酸銅，</b></p><p><b>　　(10)硫酸鉀，<

41、/b></p><p>　　(11)40％氫氧化鈉溶液</p><p>　　(12)4%硼酸吸收液：稱取29g硼酸溶解于500ml熱水中，搖勻備用。</p><p>　　(13)甲基紅—溴甲酚綠混合指示劑：5份0.2%溴甲酚綠95%乙醇溶液與1份0.2%甲基紅乙醇溶液混合均勻。</p><p>　　(14)0.1000mol/L鹽酸標準

42、溶液</p><p><b>　　1.3.2儀器</b></p><p><b>　　(1)高溫爐</b></p><p><b>　　(2)坩堝</b></p><p><b>　　(3)坩堝鉗</b></p><p><b

43、>　　(4)干燥器</b></p><p><b>　　(5)分析天平</b></p><p><b>　　(6)恒溫烘箱</b></p><p><b>　　(7)稱量瓶</b></p><p><b>　　(8)研缽</b></

44、p><p><b>　　(9)凱氏定氮儀</b></p><p><b>　　(10)索氏抽提器</b></p><p>　　凱氏定氮蒸餾裝置，如圖所示</p><p><b>　　1.4方法步驟</b></p><p>　　1.4.1水分的測定</p

45、><p>　　固態(tài)樣品必須磨碎，混勻，在磨碎過程中，要防止樣品中水分含量的變化。一般水分含量在14%一下時稱為安全水分，即在實驗室條件下進行粉碎過篩等處理，水分含量一般不會發(fā)生變化。但要求動作迅速。制備好的樣品存于干燥潔凈的磨口瓶中備用。</p><p>　　測定時，精確稱取上述樣品5-10g（視樣品性質和水分含量而定）置于已干燥、冷卻并稱至恒重的有蓋稱量瓶中，移入95-105℃常溫烘箱中，開

46、蓋烘2-4小時后取出，加蓋置干燥冷卻器內冷卻0.5小時后稱重。重復此操作，直至前后兩次質量差不超過2mg即算恒重。測定結果胺下式計算</p><p><b>　　水分（%）=</b></p><p>　　式中 m1——干燥前樣品與稱量瓶質量，g</p><p>　　m2——干燥后樣品與稱量瓶質量，g；</p><p>　

47、　m3——稱量瓶質量，g。</p><p>　　1.4.2灰分的測定</p><p><b>　　(1)瓷坩堝的準備</b></p><p>　　將坩堝用鹽酸(1：4)煮1～2小時，洗凈晾干后，用三氯化鐵與藍墨水的混合液在坩堝外壁及蓋上寫上編號，置于規(guī)定溫度(500～550℃)的高溫爐中灼燒1小時，移至爐口冷卻到200℃左右后，再移入干燥器中，

48、冷卻至室溫后，準確稱重，再放入高溫爐內灼燒30分鐘，取出冷卻稱重，直至恒重(兩次稱量之差不超過0．5mg)。準確記錄坩堝重量。</p><p>　　樣品的預處理：先粉碎成均勻的試樣，取適量試樣于已知重量的坩堝中直接進行碳化。</p><p><b>　　(2)樣品預處理</b></p><p><b>　　(3)炭化</b>

49、;</p><p>　　試樣經(jīng)上述預處理后，在放入高溫爐灼燒前要先進行碳化處理，防止在灼燒時，因溫度高試樣中的水分急劇蒸發(fā)使試樣飛揚；防止糖、蛋白質、淀粉等易發(fā)泡膨脹的物質在高溫下發(fā)泡膨脹而溢出坩堝；不經(jīng)炭化而直接灰化，碳粒易被包住，灰化不完全。炭化操作一般在電爐上進行。把坩堝置于電爐上，半蓋坩堝蓋，小心加熱使試樣在通氣情況下逐漸炭化，直至無黑煙產(chǎn)生。對于特別容易膨脹的試樣（如含糖多的食品），可先于試樣上加數(shù)滴辛

50、醇或植物油，再進行炭化。</p><p><b>　　(4)灰化</b></p><p>　　炭化后，把坩堝移入已達規(guī)定溫度(500～550℃)的高溫爐爐口處，稍停留片刻，再慢慢移入爐膛內，坩堝蓋斜倚在坩堝口,關閉爐門，灼燒1小時，至灰中無碳粒存在。打開爐門，將坩堝移至爐口處冷卻至200℃左右，移入干燥器中冷卻至室溫，準確稱重，再灼燒、冷卻、稱重，直至達到恒重。<

51、;/p><p><b>　　(5)結果計算</b></p><p><b>　　灰分（%）=</b></p><p>　　式中 m1——空坩堝質量，g；</p><p>　　m2——樣品加空坩堝質量，g；</p><p>　　m3——殘灰加牢坩堝質量，g。</p>

52、<p>　　1.4.3粗脂肪的測定</p><p>　　(1)樣品處理：精密稱取干燥并研細的樣品1-3g，無損地移入濾紙筒內。</p><p>　　(2)抽提將濾紙筒放入索氏抽提器內，連接已干燥至恒重的脂肪接受瓶，由冷凝管上端加入無水乙醚或石油醚，加量為接受瓶的2／3體積，于水浴上(溫度保持在80℃左右)加熱使乙醚或石油醚不斷的回流提取，提取時間為6～12小時，至抽提完全為止

53、。</p><p>　　(3)回收溶劑、烘干、稱重索氏提取器 取下接受瓶，回收乙醚或石油醚，待接受瓶內乙醚剩1～2ml時，在水浴上蒸干，再于105℃的恒溫箱中干燥2小時，取出放干燥器內冷卻30分鐘，稱重，并重復操作至恒重。</p><p><b>　　結果計算 </b></p><p><b>　　脂肪（%）=</b

54、></p><p>　　式中： m2——接受瓶和脂肪的質量，g；</p><p>　　m1——接受瓶的質量，g；</p><p>　　m——樣品的質量(如為測定水分后的樣品，以測定水分前的質量計)，g。</p><p>　　1.4.4粗蛋白的測定</p><p><b>　　(1)蒸餾操作</b&

55、gt;</p><p>　　將自來水經(jīng)(1)注入到蒸餾瓶夾層(2)中，使水面稍低于蒸餾瓶頸部的轉彎處。把裝有標準酸溶液的接收瓶(5)置于冷凝器(6)的下放，冷凝器的尖端插入酸液面以下，接收瓶內須先事先加入指示劑。先將樣品由漏斗(4)注入蒸餾瓶(3)中，并以少量的蒸餾水沖洗漏斗。再把氫氧化鈉溶液由漏斗(4)注入蒸餾瓶(3)中，并以少量的蒸餾水沖洗漏斗，然后用少量蒸餾水將漏斗封閉。最后加熱，將蒸餾瓶夾層(2)內的水煮

56、沸。從蒸餾瓶(3)內的水溶液沸騰開始計算時間，大約10分鐘即可蒸餾完畢。移開接收瓶后，再移去火源，以防倒吸。</p><p><b>　　(2)蒸餾瓶的洗滌</b></p><p>　　當把火源移去后，蒸餾瓶(3)內的廢液立刻六到蒸餾瓶的夾層(2)內并經(jīng)排水管(7)排出。再把裝有蒸餾水的三角瓶置于冷凝器(6)下方，并將冷凝器的簡短插入水的液面以下，再加熱至沸，然后移去

57、火源，三角瓶中的蒸餾水流到蒸餾瓶(3)內，再倒流至蒸餾瓶的夾層(2)，由排水管(7)排出。按上述方法將一起洗滌2~3次。 </p><p><b>　　(3)消化</b></p><p>　　稱取曼氏無針烏賊肌肉樣品12.0926g于100mL凱氏燒瓶中，加入0.5gCuSO4、10gK2SO4及20mLH2SO4，搖勻進行消化操作，小火加熱至完全炭化后加大火進行消化

58、，溶液呈藍綠色為終點，冷卻后用蒸餾水定容至100ml。</p><p><b>　　(4)吸收和蒸餾</b></p><p>　　取消化稀釋液5ml于反應管內，經(jīng)漏斗再加入5 mL40%Naoh溶液至強堿性，加少量蒸餾水洗漏兜次，夾好漏斗夾用水密封，蒸餾水冷凝管預先插入盛用10ml4%硼酸吸收液中，蒸餾至混合液變綠色。</p><p>　　注：

59、蒸餾大約10min即可，將冷凝管提高液面，并用蒸餾水洗滌冷凝管尖端后停止蒸餾。</p><p><b>　　(5)滴定</b></p><p>　　用0.1000mol/LHCl滴定至微紅色為終點，同時作空白對照。</p><p><b>　　(6)結果計算</b></p><p><b>

60、;　　蛋白質（％）：</b></p><p><b>　　式中： </b></p><p>　　C——鹽酸標準溶液的濃度，mol/L</p><p>　　Vl——滴定樣品吸收液時消耗鹽酸標準溶液體積，ml</p><p>　　V2——滴定空白吸收液時消耗鹽酸標準溶液體積，ml</p><

61、p>　　V3——用于蒸餾的消化稀釋液體積，ml</p><p><b>　　m——樣品質量，g</b></p><p>　　M氮——氮的摩爾質量，14.01g/mol</p><p>　　F——氮換算為蛋白質的系數(shù)，6.23。</p><p>　　1.4.5氨基酸及微量元素測定</p><p&g

62、t;<b>　　(1)氨基酸的測定</b></p><p>　　氨基酸用酸水解法測定，儀器：日立L-8900，準確稱取一定量樣品，使樣品氨基酸總量在50～75mg范圍內，置于20-30mL安瓿瓶中，加入10mL的6mol/L鹽酸，振搖使樣品溶解或使樣品均勻分散于溶液中，將安瓿瓶充氮后封口，然后置110±1℃烘箱中水解24小時，取出冷卻，打開安瓿瓶，在氮吹儀上吹至近干，將水解液全部轉

63、移到50mL容量瓶內，用超純水或去離子水定容至刻度，混勻，供衍生使用。</p><p>　　由于測定了色氨酸,因此本法還采用了堿水解法。</p><p><b>　　(2)脂肪酸的測定</b></p><p>　　脂肪酸用氣相色譜分析法測定：稱取適量的肌肉樣品,放入組織搗碎機中攪碎,真空干燥,干燥樣品用苯)石油醚(1B1體積比)提取脂肪后,用0

64、.4mol#L-1氫氧化鉀)甲醇液酯化30min,然后熱水浴濃縮,加水分層,取上層液在氣相色譜-質譜聯(lián)用儀上測定分析,由微機按面積歸一化法自動計算脂肪酸各組分含量"氣相色譜條件:色譜柱美國J&W公司產(chǎn)的DB-WAX交聯(lián)石英毛細管柱(柱長30mm,內徑0.25mm);起始柱溫180e,以1e#min-1程序升溫至220e直至所有組分全部流出,進樣口離子源溫度200e,EI70Ev,載氣為高純氦,流量1mL#min-1&l

65、t;/p><p><b>　　2實驗結果</b></p><p><b>　　2.1檢測環(huán)境參數(shù)</b></p><p>　　以上檢測環(huán)境均在室溫20℃,濕度30﹪RH的環(huán)境下進行的檢測。</p><p><b>　　2.2檢測結果</b></p><p>

66、　　2.2.1水分側定數(shù)據(jù)</p><p><b>　　表2.1黑色卵膜</b></p><p>　　Tab2.1black egg membrane</p><p><b>　　表2.2白色卵膜</b></p><p>　　Tab2.2white egg membrane</p>&

67、lt;p>　　M1---干燥瓶重 g</p><p>　　M2---樣品重量 g</p><p>　　N--- M1+ M2 g</p><p>　　m1--- m5為干燥后樣品和干燥瓶的重量 g</p><p>　　2.2.2 灰分數(shù)據(jù) </p><p><b>　　表2.3黑色卵膜

68、</b></p><p>　　Tab2.3black egg membrane</p><p><b>　　表2.4白色卵膜</b></p><p>　　Tab2.4white egg membrane</p><p>　　M---坩堝重量 g</p><p>　　N--坩堝和樣品

69、的重量 g</p><p>　　m1--- m4為炭化后坩堝和樣品的重量 g</p><p>　　2.2.3 粗脂肪測定數(shù)據(jù)</p><p><b>　　表2.5黑色卵膜</b></p><p>　　Tab2.5black egg membrane</p><p><b>　

70、　表2.6白色卵膜</b></p><p>　　Tab2.6white egg membrane</p><p>　　M---燒瓶重量 g</p><p>　　N--樣品的重量 g</p><p>　　m1--- m4為抽提后燒瓶和樣品的重量 g</p><p>　　2.2.4 蛋白質數(shù)據(jù)&

71、lt;/p><p><b>　　表2.7黑色卵膜</b></p><p>　　Tab2.7black egg membrane</p><p><b>　　表2.8白色卵膜</b></p><p>　　Tab2.8white egg membrane</p><p>　　2.2.

72、5氨基酸及微量元素數(shù)據(jù)</p><p>　　表2.9氨基酸和微量元素</p><p>　　Tab2.9 amino acids and trace elements</p><p><b>　　3結果分析與討論</b></p><p>　　實驗結果表明曼氏無針烏賊兩種顏色的受精卵卵膜的營養(yǎng)成分中水分，灰分，脂肪和蛋白質的

73、含量基本相似，含量相近，但是在氨基酸和微量元素的含量上具有很大的差異。</p><p><b>　　3.1水分</b></p><p>　　曼氏無針烏賊的卵膜中的主要成分為水分，黑色卵膜和白色卵膜中的水分含量均高達92.27%和92.32%。水是生命活動所必需的物質，含水量的多少與其生存環(huán)境有著密切的關系。烏賊胚胎的整個的胚胎發(fā)育過程均是在水中進行的，含水量多有利于營

74、養(yǎng)物質的運輸和代謝[10]。在胚胎發(fā)育的后期，水分有利于卵膜內壓力的增大，可以幫助幼體破膜而出，這一點在甲殼類胚胎中也有相關的報道[11，12]。</p><p><b>　　3.2灰分</b></p><p>　　黑色的曼氏無針烏賊中的灰分含量為1.71%白色的卵膜的灰分含量為1.76%灰分含量的多少表明該物質中無機元素含量的豐富程度，灰分含量越多表示該物質中無機物

75、的含量越高。</p><p><b>　　3.3粗脂肪</b></p><p>　　曼氏無針烏賊的卵膜中的粗脂肪含量相對較少，黑色卵膜和白色卵膜中的粗脂肪的含量分別為0.32%和0.34%脂類是胚胎發(fā)育的主要能量物質，為胚胎發(fā)育中組織、器官的構成提供物質基礎，又是構成生物膜的重要成分。卵膜中的脂肪在該階段可能只要用于生物膜的構建，不是作為能量物質，所以不需要太大的能量

76、消耗。</p><p><b>　　3.4粗蛋白</b></p><p>　　粗蛋白的數(shù)據(jù)顯示黑色卵膜的蛋白質含量為5.12%，白色卵膜的蛋白含量為5.28%。白色卵膜的蛋白含量比黑色卵膜的蛋白含量高0.16%，</p><p><b>　　3.5氨基酸</b></p><p>　　曼氏無針烏賊的兩

77、種顏色的受精卵的卵膜中均檢測出17種氨基酸。其中7種必須氨基酸(EAA)和10種非必須氨基酸(NEAA)。從氨基酸含量的表格中可以看出兩種顏色的卵膜的氨基酸含量相差較大。在曼氏無針烏賊的黑色卵膜中天門冬氨酸（Asp）、蘇氨酸（Thr）和異亮氨酸（Ile）含量最高，分別占0.5%、0.46%和0.43%。其中蛋氨酸（Met）和組氨酸（His）含量最少，均為0.13%。而白色卵膜中谷氨酸（GLU）、天門冬氨酸（ASP）和亮氨酸（LEU）所占

78、比例最高。分別為14.32%、10.65%和7.95%。組氨酸含量最低，為0.55%。天門冬氨酸普遍存在于生物合成作用中，它是生物體內賴氨酸、蘇氨酸、異亮氨酸、蛋氨酸等氨基酸及嘌呤、嘧啶堿基的合成前體，故天門冬氨酸在曼氏無針烏賊的兩種卵膜中含量均相對比較高。而組氨酸在兩者中含量均為最低，組氨酸是構成蛋白質的基本結構，對于成人它是非必須氨基酸，但對幼兒卻為必須氨基酸，對幼兒和動物的成長及其重要。其中兩種顏色的卵膜的氨基酸含量相差最大的是谷

79、氨酸（Glu），黑色卵膜含量為0.31%，白色卵膜為14.32%白色卵膜是黑色卵膜的56.19倍。曼氏無</p><p><b>　　3.6微量元素</b></p><p>　　曼氏無針烏賊的兩種顏色的卵膜中均檢測出9中微量元素。微量元素指動植物體內含量很少、需要量很少的必需元素。雖然生物體對微量元素的需求很少，但是確實生物體生長發(fā)育必不可少的成分。在黑色的卵膜中鎂（

80、Mg）元素含量最高，高達1100 mg/kg，其次是鈣（Ca）元素和鉀（K）元素分別為528 mg/kg，367 mg/kg。其中硒（Se）元素含量最少，只有0.23 mg/kg。而在白色的卵膜中磷（P）元素高達1423.2 mg/kg，其次為鈣（Ca）元素和鎂（Mg）元素，含量為313.2 mg/kg和241.2 mg/kg而含量最低的則是銅(Cu)元素，含量為0.7 mg/kg。在微量元素中兩者相差最大的是硒(Se)元素，在白化的卵

81、膜中硒元素比黑色卵膜中的高117.43倍，除鉀、鈣、銅元素是黑色卵膜中含量較高之外，其他各種微量元素的含量均是白色卵膜中比較高。</p><p><b>　　3.7本章小結</b></p><p>　　綜上所述曼氏無針烏賊兩種顏色的受精卵的卵膜中水分，灰分，粗脂肪，粗蛋白含量基本相似，差別不大，但是氨基酸含量和微量元素含量的差別比較大，所有的氨基酸以及除鉀、鈣、銅以外

82、的所有微量元素全部是白色卵膜中的含量大于黑色卵膜中的含量。由此可見由于卵膜出現(xiàn)白化的現(xiàn)象，是的卵膜內的氨基酸以及微量元素的含量出現(xiàn)大幅的變動。也有可能是曼氏無針烏賊的卵內部的營養(yǎng)成分由于某些原因移動到了卵膜上，使得卵膜的營養(yǎng)成分尤其是氨基酸和微量元素的含量發(fā)生了大幅度的變化，以后應進一步研究白化卵形成的原因，也應該進一步對烏賊卵去除卵膜的那部分進行營養(yǎng)成分的分析，了解是否是白化卵的內部成分與正常的卵也存在著較大的差別。從而減少白化卵的形

83、成，增加曼氏無針烏賊育苗的成功率和成活率。</p><p><b>　　參考文獻</b></p><p>　　常抗美, 吳常文等. 曼氏無針烏賊野生及養(yǎng)殖群體的生化特征及其形成機制的研究[J]. 海洋與湖澤2008, 39(3):145-151</p><p>　　董正之. 頭足類研究. 中國海洋科學研究及開發(fā). 曾呈奎, 周海鷗,李本川主編[

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88、ttlefish (Sepia officinalis) abundance and environmental influences—a case study using trawl fishery data in French Atlantic coastal,English Channel,and adjacent waters.ICES Journal of Marine Science,60:1149-1158</p&g

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