堆型艾美耳球蟲3-1E重組質(zhì)粒PLGA微球包被技術(shù)研究.pdf

1、堆型艾美耳球蟲是集約化養(yǎng)雞場中最常見的球蟲種類之一。堆型艾美耳球蟲寄生于小腸、屬于中等毒力的球蟲,給養(yǎng)禽業(yè)帶來嚴重的經(jīng)濟損失。雞球蟲病主要依靠藥物防治和活疫苗免疫,由于藥物的耐藥性和藥物殘留等問題,活疫苗免疫又存在成本高、免疫要求高等缺陷,防治球蟲病急需尋求新途徑。DNA疫苗的一個顯著優(yōu)勢是刺激機體產(chǎn)生廣泛的細胞免疫反應(yīng)和持久的免疫記憶,但裸質(zhì)粒DNA疫苗注射給藥方式不夠方便、組織刺激性大、生產(chǎn)成本高；裸質(zhì)粒DNA疫苗口服免疫在實際應(yīng)用

2、時由于受到胃酸、胃蛋白酶等對抗原的裂解作用的影響,導(dǎo)致了質(zhì)粒疫苗的失活,產(chǎn)生的免疫效果較低,常須加大免疫劑量才可獲得足夠的免疫力。本試驗以疏水性材料乳酸／羥基乙酸共聚物(PLGA)為研究對象,將雞堆型艾美耳球蟲(E.acervulina)重組表達質(zhì)粒pcDNA3.1-3-1E包裹,制成微球并用該微球進行動物試驗,表明重組表達質(zhì)粒pcDNA3.1-3-1E能成功的被PLGA包裹并發(fā)揮免疫功效。
　　 本試驗用PLGA將重組表達質(zhì)粒

3、pcDNA3.1-3-1E,運用水包油包水(W／O／W)乳化技術(shù)制備pcDNA3-3-1E PLGA微球,分別測定微球的形態(tài)、粒徑、質(zhì)粒DNA包封率、載藥量和釋放程度,體外分別進行模擬雞胃液和腸液試驗并且比較肌注裸質(zhì)粒雞群和口服免疫雞群的免疫效果。結(jié)果顯示微球的包封率,載藥百分比分別是82.7％,1.89％,它的粒徑80％小于12μm。在模擬雞的胃腸液累積釋放試驗中,它的累積釋放能力依次為pH3.0>pH7.4,在模擬的雞的腸液中,微球

4、30d累積釋放81.3％,表明了微球具有一定的緩釋效果。裸質(zhì)粒與微球中質(zhì)粒超螺旋比例差距不明顯,這表明在包被過程中的超螺旋質(zhì)粒未發(fā)生降解。
　　 將PLGA微球口服免疫,重組質(zhì)粒pcDNA3-3-1E肌注免疫,后1d,10d,30d樣品,免疫后1d,10d口服微球免疫組和肌注組各組織均可檢測到3-1E基因,免疫后30d,口服微球免疫組各組織均仍檢測到3-1E基因,而肌注組僅在注射部位檢測到3-1E基因,表明口服的pcDNA3-3

5、-1EPLGA微球能在機體內(nèi)釋放表達且持續(xù)釋放至少30d。pcDNA3-3-1E PLGA微球免疫后不同時間雞體外周血淋巴細胞轉(zhuǎn)化水平和不同時間雞外周血中IgG含量顯著增高,表明口服pcDNA3-3-1EPLGA微球免疫能有效的提高雛雞的細胞免疫和體液免疫水平。
　　 通過增重、病變、卵囊產(chǎn)量、抗球蟲指數(shù)(ACI)等多項參數(shù)來對重組質(zhì)粒pcDNA3-3-1E PLGA微球免疫效果進行評價。結(jié)果顯示重組質(zhì)粒pcDNA3-3-1E