棉花ph1基因的克隆與功能分析.pdf

1、棉花是我國(guó)的主要經(jīng)濟(jì)作物之一，棉花纖維品質(zhì)的改良長(zhǎng)期以來(lái)備受人們關(guān)注。棉花也是人們衣被和日用紡織品的主要原料，大多數(shù)布料都要經(jīng)過(guò)有機(jī)顏料染色，而其中大部分有機(jī)染料都是有毒的?，F(xiàn)在醫(yī)學(xué)研究表明，服飾布料由于印染而殘留的有毒化學(xué)物質(zhì)和染料殘留物，會(huì)引起皮膚過(guò)敏、搔癢，甚至通過(guò)皮膚滲透進(jìn)入血管和內(nèi)臟，長(zhǎng)期累積于體內(nèi)，損害人們的身體健康。而彩棉服飾則沒(méi)有上述危害，相反它質(zhì)地柔軟、透氣、吸汗、富有彈性，穿著舒適，有利于保護(hù)人們的身體健康。隨著生活

2、水平的提高和對(duì)健康日益重視，人們對(duì)天然彩色棉的需求大大增加。目前，天然棉花纖維主色為白色，雖然有棕色和綠色，但色彩較為單調(diào)很難滿足人們的日常需求。因此，拓寬彩色棉色譜，對(duì)彩色棉產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有舉足輕重的作用。
　　 目前，在棉花自身調(diào)控顏色的基因還沒(méi)有克隆出來(lái)情況下，棉花纖維顏色的改良大部分依賴于棉花以外的基因資源，因此克隆棉花自身調(diào)控顏色的基因顯得尤為重要。本試驗(yàn)以矮牽?；ㄉ膒h1基因（登陸號(hào)AB027455）為探針對(duì)棉花ES

3、T數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行BLAST檢索，獲得多條與之高度相似的棉花EST序列；將獲得的EST序列進(jìn)行首尾拼接,獲得新的Contig；以獲得的Contig反復(fù)對(duì)棉花EST公共數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行BLAST檢索、拼接,盡可能獲得全長(zhǎng)cDNA；根據(jù)獲得的序列設(shè)計(jì)引物，克隆出調(diào)節(jié)棉花纖維pH值的基因，將其命名為ph1基因，并應(yīng)用生物信息學(xué)軟件對(duì)其蛋白質(zhì)的功能進(jìn)行了預(yù)測(cè)分析，同時(shí)構(gòu)建植物表達(dá)載體，通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化小擬南芥，對(duì)所克隆的棉花ph1新基因進(jìn)行初步的功能驗(yàn)

4、證。同時(shí)將含有色素基因的pCAMBIA2301-PchsA-F3’5’H–difF載體通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法成功的轉(zhuǎn)化到了粉色矮牽牛中，成功獲得轉(zhuǎn)基因植株。
　　 本研究通過(guò)電子克隆和分子生物學(xué)的方法，已經(jīng)成功克隆獲得棉花ph1基因，其全長(zhǎng)1378bp，最大開(kāi)放閱讀框長(zhǎng)度為1248bp,編碼416個(gè)氨基酸；并且構(gòu)建了植物表達(dá)載體pBI121-ph1及RNAi載體2300-pUCCRNAi-phsh，通過(guò)農(nóng)桿菌GV3101浸染了小擬南芥