二、三倍體雌性虹鱒(Oncorhynchus mykiss)VG，SOX9，SOX9A2，DMRT1基因表達的比較研究.pdf

1、虹鱒Onchorynchus mykiss（Walbaum）是重要的冷水性養(yǎng)殖魚類。為提高產(chǎn)品的質量和群體產(chǎn)量，近年來養(yǎng)殖人工誘導三倍體不育系虹鱒已成為一種發(fā)展趨勢。由于染色體多倍化，三倍體虹鱒的生殖機制發(fā)生了改變，甚至導致了三倍體虹鱒雌性不育。性腺是魚類進行繁殖活動的基礎，只有充分了解性腺發(fā)育和配子發(fā)生的規(guī)律，才能對魚類的繁殖過程更好地進行調控。盡管有關三倍體虹鱒性腺發(fā)育已有一些研究，但主要集中于對其整個發(fā)育過程的組織學、細胞學、生殖

2、內分泌學等的系統(tǒng)研究，尤其缺乏分子生物學水平的研究。
　　 三倍體雌性虹鱒卵巢發(fā)育經(jīng)歷了卵原細胞→卵黃發(fā)育前期卵母細胞→敗育的卵母細胞與卵原細胞簇共存→卵原細胞簇與類生精細胞囊共存→類生精細胞囊的過程，卵巢在發(fā)育的中后期具有類雄性化的趨勢。本研究以受精后10月齡和20月齡的二、三倍體雌性虹鱒為試驗材料，采用流式細胞方法對其倍性進行鑒定：采用波恩氏液固定、常規(guī)石蠟切片的方法觀察卵巢結構及發(fā)育情況。以efla基因作為內參，采用EVA

3、RE green實時熒光定量PCR技術對二、三倍體雌性虹鱒性腺發(fā)育過程中的Vg（卵黃蛋白原），Sox9a2（SRY-box containing gene9a2），Sox9（SRY-box containinggene9），Dmrtl（doublesex and mab-3-related transcription factor1）基因的表達（mRNA）情況進行了比較研究，以探討三倍體雌性虹鱒類雄性化的分子機制。
　　 試驗結

4、果表明：
　　 1.與二倍體相比，10月齡的三倍體雌性虹鱒卵巢發(fā)育未見明顯異常；20月齡的三倍體雌性虹鱒卵巢出現(xiàn)卵原細胞簇和類生精細胞囊共同存在的嵌合現(xiàn)象，并且在三倍體20月齡的卵巢中，存在因生殖細胞空泡化、溶解、壞死而形成的病灶區(qū)。
　　 2.三倍體雌性虹鱒中有內源性Vg的少量合成。10月齡的三倍體雌性虹鱒，由于其去雌性化，Vg基因的相對表達量維持在一個很低的水平，僅是同時期二倍體表達量的0.12倍，且差異顯著（p<0

5、.05），而在20月齡時，由于雄性化的進程加快，三倍體Vg的相對表達量更是極低，并顯著性地低于二倍體（p<0.05），僅是二倍體表達量的0.05倍。
　　 3.sox9a2基因與三倍體雌性虹鱒的性別分化似乎沒有直接的關系。10月齡時，三倍體雌性虹鱒sox9a2的表達量顯著性低于二倍體（p<0.05），僅是同時期二倍體表達量的0.08倍；在20月齡時，三倍體雌性虹鱒sox9a2的表達仍然顯著性低于二倍體（p<0.05），是同時期二

6、倍體表達量的0.05倍，也就是說，三倍體雌性虹鱒sox9a2的表達在10月齡和20月齡中基本上是沒有太大的變化。
　　 4.Sox9基因在三倍體雌性虹鱒中與性別分化有關，支持其作為下游的基因起作用。10月齡三倍體雌性虹鱒中，Sox9基因的相對表達量顯著性增加（p<0.05），是同時期二倍體的7.16倍；而20月齡的三倍體雌性虹鱒中，雖然相對于10月齡來說，Sox9基因的相對表達量有所降低，但仍然維持在一個較高的水平，是同期二倍體

7、的1.84倍（p<0.05）。
　　 5.Dmrtl基因與三倍體雌性虹鱒的雄性化有關，支持其作為上游基因起作用。相對于二倍體來說，在10月齡，由于雄性化的開始，Dmrtl基因的表達量在三倍體雌性虹鱒中開始增加，且差異不顯著，是二倍體的1.14倍（p>0.05）；在20月齡中，因雄性化的進程加快，其表達量激增，呈超表達趨勢，是同期二倍體表達量的14.5倍（p<0.05），Dmrtl基因可能激活Sox9基因，介導三倍體雌性虹鱒的雄性