pbs緩沖液地配方

1、<p><b>　　PBS緩沖液的配方</b></p><p>　　發(fā)布日期:2008-11-11 熱門指數(shù):865 </p><p>　　PBS是最普遍不過的實驗室緩沖液，但其配方各異。以下是我的總結(jié)： </p><p><b>　　母液的配制： </b></p><p>　　0.2M

2、 Na2HPO4：稱取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水</p><p>　　0.2M NaH2PO4：稱取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水</p><p>　　各種濃度PB(pH=7.4)的配制：</p><p>　　先配 0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L的 NaH

3、2PO4， 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4, 即可。</p><p>　　然后 只需將0.2M PB (pH=7.4)按相應(yīng)比例適當稀釋 即可，如：</p><p>　　0.1M PB（PH=7.4） ：取 500ml 0.2M PB，加水稀釋至 1000ml 即可。</p><p>　　0.01M PB （PH=7.4）：取50ml 0.2M PB

4、，加水稀釋至 1000ml 即可。</p><p>　　0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀釋至 1000ml 即可。 </p><p>　　若需要 NaCL 的話，加入 NaCL 至0.9%（g/100ml）即可。 </p><p>　　另：其它各種另 PH值的 0.2M PB（100ml)配方 ：</p>&l

5、t;p>　　pH 0.2M NaH2PO4（ml） 0.2M Na2HPO4（ml）</p><p>　　5.7 93.5 6.5</p><p>　　5.8 92 8 &

6、lt;/p><p>　　5.9 90 10</p><p>　　6.0 87.7 12.3</p><p>　　6.1 85 15<

7、/p><p>　　6.2 81.5 18.5</p><p>　　6.3 77.5 22.5</p><p>　　6.4 73.5 26.5</

8、p><p>　　6.5 68.5 31.5</p><p>　　6.6 62.5 37.5</p><p>　　6.7 56.5 43.5</p

9、><p>　　6.8 51 49</p><p>　　6.9 45 55</p><p>　　7.0 38 62</p>&

10、lt;p>　　7.1 33 67</p><p>　　7.2 28 72</p><p>　　7.3 23 77</p><p>

11、;　　7.4 19ml 81ml</p><p>　　7.5 16 84</p><p>　　7.6 13 87</p><p>　　7.

12、7 10.5 0.5</p><p>　　7.8 8.5 91.5</p><p>　　7.9 7 93</p><p>　　8.0

13、 5.3 94.7 </p><p>　　分子生物學常用溶液配制</p><p>　　發(fā)布日期:2008-8-25 熱門指數(shù):3471 </p><p>　　分子生物學常用溶液配制</p><p>　　一、分子生物學常用貯存液的配制</p><p&g

14、t;　　1．30%丙烯酰胺溶液</p><p>　　【配制方法】將29g丙烯酰胺和1g N，N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為60ml的水中。加熱至37℃溶解之，補加水至終體積為100ml。用濾器（0.45μm孔徑）過濾除菌，查證該溶液的pH值應(yīng)不大于7.0，置棕色瓶中保存于室溫。</p><p>　　【注意】丙烯酰胺具有很強的神經(jīng)毒性并可以通過皮膚吸收，其作用具累積性。稱量丙烯酰胺和亞甲雙

15、丙烯酰胺時應(yīng)戴手套和面具。可認為聚丙烯酰胺無毒，但也應(yīng)謹慎操作，因為它還可能會含有少量未聚合材料。</p><p>　　一些價格較低的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺通常含有一些金屬離子，在丙烯酰胺貯存液中加入大約0.2體積的單床混合樹脂（MB-1Mallinckrodt），攪拌過夜，然后用Whatman 1號濾紙過濾以純化之。</p><p>　　在貯存期間，丙烯酰胺和雙丙烯酰胺會緩慢轉(zhuǎn)化成丙烯酰和

16、雙丙烯酸。</p><p><b>　　2．40%丙烯酰胺</b></p><p>　　【配制方法】把380g丙烯酰胺（DNA測序級）和20g N，N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為600ml的蒸餾水中。繼續(xù)按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法處理，但加熱溶解后應(yīng)以蒸餾水補足至終體積為1L。</p><p>　　【注意】見上述配制30%丙烯酰胺的說

17、明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列測定。</p><p><b>　　3．放線菌素D溶液</b></p><p>　　【配制方法】把20mg放線菌素D溶解于4ml 100%乙醇中，1:10稀釋貯存液，用100%乙醇作空白對照讀取OD440值。放線菌素D（分子量為1255）純品在水溶液中的摩爾消化系數(shù)為21，900，故而1mg/ml的放線菌素D溶液在440nm處的吸光

18、值為0.182，放線菌素D的貯存液應(yīng)放在包有箔片的試管中，保存于-20℃。</p><p>　　【注意】放線菌素D是致畸劑和致癌劑,配制該溶液時必須戴手套并在通風櫥內(nèi)操作,而不能在開放在實驗桌面上進行,謹防吸入藥粉或讓其接觸到眼睛或皮膚。</p><p>　　藥廠提供的作治療用途的放線菌素D制品常含有糖或鹽等添加劑。只要通過測量貯存液在440nm波長處的光吸收確定放線菌素D的濃度，這類制品

19、便可用于抑制自身引導(dǎo)作用。</p><p>　　4．0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液</p><p>　　【配制方法】在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH調(diào)至pH值至7.0，用蒸餾水定容1ml，分裝成小份保存于-70℃</p><p>　　5．10mol/L乙酸酰溶液</p><p>　　【配制方法】把7

20、70g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后過濾除菌。</p><p>　　6．10%過硫酸銨溶液</p><p>　　【配制方法】把1g過硫酸銨溶解于終量為10ml的水溶液中，該溶液可在4℃保存數(shù)周。</p><p><b>　　7．BCIP溶液</b></p><p>　　【配制方法】把0.5g的5-溴-4-氯

21、-3-吲哚磷酸二鈉鹽（BCIP）溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃</p><p>　　8．2×BES緩沖鹽溶液</p><p>　　【配制方法】用總體積90ml的蒸餾水溶解1.07g鹽溶液BES[N，N-雙（2-羥乙基）-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4，室溫下用HCl調(diào)節(jié)該溶液的pH值至6.96、然后加入蒸餾水定容至100m

22、l，用0.22μm濾器過濾除菌，分裝成小份，保存于-20℃。</p><p>　　9．1mol/L CaCl2溶液</p><p>　　【配制方法】在200ml蒸餾水中溶解54g CaCl2?6H2O，用0.22μm濾器過濾除菌，分裝成10ml小份貯存于-20℃。</p><p>　　【注意】制備感受態(tài)細胞時，取出一小份解凍并用蒸餾水稀釋至100ml，用Nalgen

23、e濾器（0.45μm孔徑）過濾除菌，然后驟冷至0℃。</p><p>　　10．2.5mol/L CaCl2溶液</p><p>　　【配制方法】在20ml蒸餾水中溶解13.5g CaCl2?6H2O，用0.22μm濾器過濾除菌，分裝成1ml小份貯存于-20℃。</p><p>　　11．1mol/L二硫蘇糖醇（DTT）溶液</p><p>

24、　　【配制方法】用20ml 0.01mol/L乙酸鈉溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT，過濾除菌后分裝成1ml小份貯存于-20℃。</p><p>　　【注意】DTT或含有DTT的溶液不能進行高壓處理。</p><p>　　12．脫氧核苷三磷酸（dNTP）溶液</p><p>　　【配制方法】把每一種dNTP溶解于水至濃度各為100mmol/L左右，用微量移液

25、器吸取0.05mol/l Tris堿分別調(diào)節(jié)每一dNTP溶液的pH值7.0（用pH試紙檢測），把中和后的每種dNTP溶液各取一份作適當稀釋，在下表中給出的波長下讀取光密度計算出每種dNTP的實際濃度，然后用水稀釋成終濃度為50mmol/L的dNTP，分裝成小份貯存于-70℃。</p><p>　　堿基波長（nm）消化系數(shù)（ε）[L/（mol?cm）]</p><p>　　A2591

26、.54×104</p><p>　　G2531.37×104</p><p>　　C2719.10×103</p><p>　　T2607.40×103</p><p>　　比色杯光徑為1cm時,吸光度=εM</p><p>　　13．0.5mol/l EDTA(pH

27、8.0)溶液</p><p>　　【配制方法】在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-Na?2H2O），在磁力攪拌器上劇烈攪拌，用NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值至8.0（約需20g NaOH顆粒）然后定容至1L，分裝后高壓滅菌備用。</p><p>　　【注意】EDTA二鈉鹽需加入NaOH將溶液的pH值調(diào)至接近8.0,才能完全溶解。</p><p>

28、;　　14．溴化乙錠（10mg/ml溶液）</p><p>　　【配制方法】在100ml水中加入1g溴化乙錠，磁力攪拌數(shù)小時以確保其完全溶解，然后用鋁箔包裹容器或轉(zhuǎn)移至棕色瓶中，保存于室溫。</p><p>　　【注意】小心：溴化乙錠是強誘變劑并有中度毒性，使用含有這種染料的溶液時務(wù)必戴上手套，稱量染料時要戴面罩。</p><p>　　15．2×HEPES

29、緩沖鹽溶液</p><p>　　【配制方法】用總量為90ml的蒸餾水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO4?2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES，用0.5mol/l NaOH調(diào)節(jié)pH值至7.05，再用蒸餾水定容至100ml。用0.22μm濾器過濾除菌，分裝成5ml小份，貯存于-20℃。</p><p><b>　　16．IPTG溶液</

30、b></p><p>　　【配制方法】IPTG為異丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量為238.3），在8ml蒸餾水中溶解2g IPTG后，用蒸餾水定容至10ml，用0.22μm濾器過濾除菌，分裝成1ml小份貯存于-20℃。</p><p>　　17．1mol/L乙酸鎂溶液</p><p>　　【配制方法】在800ml水中溶解214.46g四水乙酸鎂，用水定容至

31、1L過濾除菌。</p><p>　　18．1mol/L MgCl2溶液</p><p>　　【配制方法】在800ml水中溶解203.4g MgCl2?6H2O，用水定容至1L，分裝成小份并高壓滅菌備用。</p><p>　　【注意】MgCl2極易潮解，應(yīng)選購小瓶（如100g）試劑，啟用新瓶后勿長期存放。</p><p>　　19．β-巰基乙醇

32、（BME）溶液</p><p>　　【配制方法】一般得到的是14.4mol/L溶液，應(yīng)裝在棕色瓶中保存于4℃。</p><p>　　【注意】BME或含有BME的溶液不能高壓處理。</p><p><b>　　20．NBT溶液</b></p><p>　　【配制方法】把0.5g氯化氮藍四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰

33、胺中,保存于4℃。</p><p><b>　　21．酚/氯仿溶液</b></p><p>　　【配制方法】把酚和氯仿等體積混合后用0.1mol/L Tris?HCl(pH7.6)抽提幾次以平衡這混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆蓋等體積的0.01mol/l Tris?HCl(pH=7.6)液層,保存于4℃。</p><p>　　【注意】酚腐蝕性很

34、強，并可引起嚴重灼傷，操作時應(yīng)戴手套及防護鏡，穿防護服。所有操作均應(yīng)在化學通風櫥中進行。與酚接觸過的部位皮膚應(yīng)用大量的水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。</p><p>　　22．10mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液</p><p>　　【配制方法】用異丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml（10mmol/L），分裝成小份貯存于-20℃。如有必要可配成濃度高達17.4mg/ml的貯

35、存液（100mmol/L）。</p><p>　　【注意】PMSF嚴重損害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚，吸入、吞進或通過皮膚吸收后有致命危險。一旦眼睛或皮膚接觸了PMSF，應(yīng)立即用大量水沖洗之。凡被PMSF污染的衣物應(yīng)予丟棄。</p><p>　　PMSF在水溶液中不穩(wěn)定。應(yīng)在使用前從貯存液中現(xiàn)用現(xiàn)加于裂解緩沖液中。PMSF在水溶液中的活性喪失速率隨pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃

36、。pH值為8.0時,20μmmol/l PMSF水溶液的半壽期大約為85min，這表明將PMSF溶液調(diào)節(jié)為堿性（pH>8.6）并在室溫放置數(shù)小時后,可安全地予以丟棄。</p><p>　　23．磷酸鹽緩沖溶液（PBS）溶液</p><p>　　【配制方法】在800ml蒸餾水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl調(diào)節(jié)溶液的

37、pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in2(1034×105Pa)高壓下蒸氣滅菌20min。保存于室溫。</p><p>　　24．1mol/L乙酸鉀（pH=7.5）溶液</p><p>　　【配制方法】將9.82g乙酸鉀溶解于90ml純水中，用2mol/L乙酸調(diào)節(jié)pH值至7.5后加入純水定容到1L，保存于-20℃。</p><p>　　25．乙酸

38、鉀溶液（用于堿裂解）</p><p>　　【配制方法】在60ml 5mol/L乙酸鉀溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成鉀濃度為3mol/L而乙酸根濃度為5mol/L的溶液。</p><p>　　26．3mol/L乙酸鈉（pH5.2和pH7.0）溶液</p><p>　　【配制方法】在80ml水中溶解408.1g三水乙酸鈉，用冰乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.2或

39、用稀乙酸調(diào)節(jié)pH值至7.0，加水定容到1L，分裝后高壓滅菌。</p><p>　　27．5mol/L NaCl溶液</p><p>　　【配制方法】在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L，分裝后高壓滅菌。</p><p>　　28．10%十二烷基硫酸鈉（SDS）溶液</p><p>　　【配制方法】在900ml水中溶解100

40、g電泳級SDS，加熱至68℃助溶，加入幾滴濃鹽酸調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分裝備用。</p><p>　　【注意】SDS的微細晶粒易擴散，因此稱量時要戴面罩，稱量完畢后要清除殘留在稱量工作區(qū)和天平上的SDS，10%SDS溶液無須滅菌。</p><p>　　29．20×SSC溶液</p><p>　　【配制方法】在800ml水中溶解175.3

41、g NaCl和88.2g檸檬酸鈉，加入數(shù)滴10mol/l NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0，加水定容至1L，分裝后高壓滅菌。</p><p>　　30．20×SSPE溶液</p><p>　　【配制方法】在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4?H2O和7.4g EDTA,用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至7.4（約需6.5ml 10ml/L NaOH）,加水定

42、容至1L,分裝后高壓滅菌。</p><p>　　31．100%三氯乙酸溶液</p><p>　　【配制方法】在裝有500g TCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100%（M/V）TCA。</p><p>　　32．1mol/L Tris溶液</p><p>　　【配制方法】在800ml水中溶解121.91g Tris堿,加入濃HCl調(diào)

43、節(jié)pH值至所需值。</p><p>　　pHHCl 7.4 70ml 7.6 60ml 8.0 42ml</p><p>　　應(yīng)使溶液冷至室溫后方可最后調(diào)定pH值，加水定容至1L，分裝后高壓滅菌。</p><p>　　【注意】如1mol/L溶液呈現(xiàn)黃色，應(yīng)予丟棄并置備質(zhì)量更好的Tris。</p><

44、;p>　　盡管多種類型的電極均不能準確測量Tris溶液的pH值，但仍可向大多數(shù)廠商購得合適的電極。</p><p>　　Tris溶液的pH值因溫度而異，溫度每升高1℃，pH值大約降低0.03個單位。例如：0.05mol/L的溶液在5℃、25℃、和37℃時的pH值分別為9.5、8.9和8.6。</p><p>　　33．Tris緩沖鹽溶液（TBS）（25mmol/l Tris）<

45、/p><p>　　【配制方法】在800ml蒸餾水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris堿，加入0.015g酚并用HCl調(diào)至pH值至7.4，用蒸餾水定容至1L，分裝后在151bf/in2(1.034×105Pa)高壓下蒸汽滅菌20min，于室溫保存。</p><p>　　34．X-gal溶液</p><p>　　【配制方法】X-gal為5-溴-4

46、-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二甲基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的貯存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中，裝有X-gal溶液的試管須用鋁箔封裹以防因受光照而被破壞，并應(yīng)貯存于-20℃。X-gal溶液無須過濾除菌。</p><p><b>　　二、常用抗生素溶液</b></p><p>　　抗生素貯存液a工作濃度</p><p>

47、;　　濃度保存條件嚴緊型質(zhì)粒松弛型質(zhì)粒</p><p>　　氨芐青霉素50mg/ml(溶于水)-20℃20μg/ml60μg/ml</p><p>　　羧芐青霉素50mg/ml(溶于水)-20℃20μg/ml60μg/ml</p><p>　　氯霉素34mg/ml(溶于乙醇)-20℃25μg/ml170μg/ml</p>

48、<p>　　卡那霉素10mg/ml(溶于水)-20℃10μg/ml50μg/ml</p><p>　　鏈霉素10mg/ml(溶于水)-20℃10μg/ml50μg/ml</p><p>　　四環(huán)素b5mg/ml(溶于乙醇)-20℃10μg/ml50μg/ml</p><p>　　a：以乙醇為溶劑的抗生素溶液無須除菌處理。所有抗生素溶

49、液均應(yīng)放于不透光的容器保存。</p><p>　　b：鎂離子是四環(huán)素的拮抗劑，四環(huán)素抗性菌的篩選應(yīng)使用不含鎂鹽的培養(yǎng)基（如LB培養(yǎng)基）。</p><p>　　三、常用的電泳緩沖液</p><p>　　緩沖液使用液濃貯存液（每升）</p><p>　　Tris-乙酸（TAE）1×：0.04mol/L Tris-乙酸50

50、5;：242g Tris堿</p><p>　　0.001mol/L EDTA57.1ml冰乙酸</p><p>　　100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)</p><p>　　Tris-磷酸（TPE）1×:0.09mol/L Tris-磷酸10×:10g Tris堿</p><p>　　0.002mo

51、l/L EDTA15.5ml85%磷酸（1.679g/ml）</p><p>　　40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)</p><p>　　Tris-硼酸（TBE）a0.5×0.045mol/L Tris-硼酸5×：54g Tris堿</p><p>　　0.001mol/L EDTA27.5硼酸</p>&l

52、t;p>　　20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)</p><p>　　堿性緩沖液b1×:50mmol/L NaOH1×:5ml 10mol/L NaOH</p><p>　　1mmol/L EDTA2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)</p><p>　　Tris-甘氨酸c1×:25mmol/L

53、 Tris5×:15.1g Tris</p><p>　　250mmol/L 甘氨酸94g 苷氨酸（電泳級）（pH8.3）</p><p>　　0.1% SDS50ml 10% SDS(電泳級)</p><p>　　實驗室常用技術(shù)參數(shù)資料（二）</p><p>　　發(fā)布日期:2003-11-1 熱門指數(shù):6468 </

54、p><p><b>　　二、常用緩沖液 </b></p><p>　　1．分子克隆常用緩沖液</p><p><b>　　2．磷酸緩沖液</b></p><p>　　（1）25℃下0.1mol/L磷酸鉀緩沖液的配制※</p><p>　　pH1mol/L K2HPO4(ml)

55、1mol/L KH2PO4(ml)</p><p>　　5.88.591.5</p><p>　　6.013.286.8</p><p>　　6.219.280.8</p><p>　　6.427.872.2</p><p>　　6.638.161.9</p><p>　　6

56、.849.750.3</p><p>　　7.061.538.5</p><p>　　7.271.728.3</p><p>　　7.480.219.8</p><p>　　7.686.613.4</p><p>　　7.890.89.2</p><p>　　8.094

57、.06.2</p><p>　　（2）25℃下0.1mol/L磷酸鈉緩沖液的配制※</p><p>　　pH1mol/L Na2HPO4(ml)1mol/L NaH2PO4(ml)</p><p>　　5.87.992.1</p><p>　　6.012.088.0</p><p>　　6.217.8

58、82.2</p><p>　　6.425.574.5</p><p>　　6.635.264.8</p><p>　　6.846.353.7</p><p>　　7.057.742.3</p><p>　　7.268.431.6</p><p>　　7.477.422.6

59、</p><p>　　7.684.515.5</p><p>　　7.889.610.4</p><p>　　8.093.26.8</p><p>　　※:用蒸餾水將混合的兩種1mol/L貯存液稀釋至1000ml，根據(jù)Henderson-Hasselbalch方程計算其pH值：</p><p>　　pH=p

60、K’+1g([質(zhì)子受體]/[質(zhì)子供體])</p><p>　　在此，pK’=6.86(25℃)。</p><p><b>　　3．電泳緩沖液</b></p><p><b>　　測序凝膠加樣緩沖液</b></p><p><b>　　98%去離子甲酰胺</b></p>

61、;<p>　　10mol/L EDTA(pH8.0)</p><p>　　0.025%二甲苯青FF</p><p><b>　　0.025%溴酚藍</b></p><p>　　甲酰胺：許多批號的試劑級甲酰胺，其純度符合使用要求，無須再進行處理。不過，一旦略呈黃色，則應(yīng)用在磁力攪拌器上將甲酰胺與Dowex XG8混合床樹脂共同攪拌1

62、小時進行去離子處理，并用Whatman 1號濾紙過濾2次，去離子甲酰胺分裝成小份，充氮存于-70℃。</p><p><b>　　常用的電泳緩沖液</b></p><p>　　緩沖液使用液濃貯存液（每升）</p><p>　　Tris-乙酸（TAE）1×：0.04mol/L Tris-乙酸50×：242g Tris堿

63、</p><p>　　0.001mol/L EDTA57.1ml冰乙酸</p><p>　　100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)</p><p>　　Tris-磷酸（TPE）1×:0.09mol/L Tris-磷酸10×:10g Tris堿</p><p>　　0.002mol/L EDTA15.5

64、ml85%磷酸（1.679g/ml）</p><p>　　40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)</p><p>　　Tris-硼酸（TBE）a0.5×0.045mol/L Tris-硼酸5×：54g Tris堿</p><p>　　0.001mol/L EDTA27.5硼酸</p><p>　　20ml

65、 0.5mol/L EDTA(pH8.0)</p><p>　　堿性緩沖液b1×:50mmol/L NaOH1×:5ml 10mol/L NaOH</p><p>　　1mmol/L EDTA2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)</p><p>　　Tris-甘氨酸c1×:25mmol/L Tris5×

66、:15.1g Tris</p><p>　　250mmol/L 甘氨酸94g 苷氨酸（電泳級）（pH8.3）</p><p>　　0.1% SDS50ml 10% SDS(電泳級)</p><p><b>　　說明：</b></p><p>　　①TBE溶液長時間存放后會形成沉淀物，為避免這一問題，可在室溫下用玻璃瓶

67、保存5×溶液，出現(xiàn)沉淀后則予以廢棄。</p><p>　　以片都以1×TBE作為使用液（即1：5稀釋濃貯液）進行瓊脂糖凝膠電泳。但0.5×的使用液已具備足夠的緩沖容量。目前幾乎所有的瓊脂糖膠電泳都以1：10稀釋的貯存液作為使用液。</p><p>　　進行聚丙烯酰胺凝膠垂直槽的緩沖液槽較小， 故通過緩沖液的電流量通常較大，需要使用1×TBE以提供足夠

68、的緩沖容量。</p><p>　?、趬A性電泳緩沖液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。</p><p>　?、跿ris-甘氨酸緩沖液用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。</p><p>　　2×SDS凝膠加樣緩沖液：</p><p>　　100mmol/L Tris?HCl(6.8)</p><p>　　200mmol/L二硫蘇糖醇（DTT

69、）</p><p>　　4%SDS（電泳級）</p><p><b>　　0.2%溴酚藍</b></p><p><b>　　20%甘油</b></p><p>　　不含DTT的2×SDS凝膠加樣緩沖液可保存于室溫，應(yīng)在臨用前取1mol/L貯存液現(xiàn)加于上述緩沖液中。</p>

70、<p><b>　　4．凝膠加樣緩沖液</b></p><p>　　緩沖液類型6×緩沖液貯存溫度</p><p>　?、?.25%溴酚藍</p><p><b>　　4℃</b></p><p>　　0.25%二甲苯青FF</p><p>　　4

71、0%（W/V）蔗糖水溶液</p><p>　?、?.25溴酚藍</p><p><b>　　室溫</b></p><p>　　0.25%二甲苯青FF</p><p>　　15%聚蔗糖(Ficoll400)</p><p>　?、?.25%溴酚藍</p><p>

72、;<b>　　4℃</b></p><p>　　0.25%二甲苯青FF</p><p><b>　　30%甘油水溶液</b></p><p>　　Ⅳ0.25%溴酚藍</p><p><b>　　4℃</b></p><p>　　40%(W/V)蔗

73、糖水溶液</p><p>　　堿性加樣緩沖液:　</p><p>　　300mmol/L NaOH</p><p>　　6mmol/L EDTA</p><p>　?、?8%聚蔗糖(Ficoll400)</p><p><b>　　4℃</b></p><p>

74、　　0.15%溴甲酚綠</p><p>　　0.25%二甲苯青FF</p><p>　　使用以上凝膠加樣緩沖液的目的有三：增大樣品密度；以確保DNA均勻進入樣品孔內(nèi)；使樣品呈現(xiàn)顏色，從而使加樣操作更為便利，含有在電塊中能以可預(yù)知速率向陽極泳動的染料。溴酚藍在瓊脂糖中移動的速率約為二甲苯青FF的2.2倍，而與瓊脂糖濃度無關(guān)。以0.5×TBF作電泳液時，溴酚藍在瓊脂糖中的泳動速率

75、約與長300bp的雙鏈線狀DNA相同，而二甲苯青FF的泳動則與長4kb的雙鏈線狀DNA相同。在瓊脂糖濃度為0.5%～1.4%的范圍內(nèi)，這些對應(yīng)關(guān)系受凝膠濃度變化的影響并不顯著。</p><p>　　選用哪一種加樣染料純屬個人喜惡。但是，對于堿性凝膠應(yīng)當使用溴甲酚綠作為示蹤染料，因為在堿性pH條件下其顯色較溴酚更藍為鮮明。</p><p>　　5．各種pH值的Tris緩沖液的配制</p

76、><p>　　各種pH值的Tris緩沖液的配制　</p><p>　　所需pH值（25℃）0.1mol/L HCl的體積</p><p><b>　　7．145．7</b></p><p><b>　　7．244．7</b></p><p><b>　　7．34

77、3．4</b></p><p><b>　　7．442．0</b></p><p><b>　　7．540．3</b></p><p><b>　　7．638．5</b></p><p><b>　　7．736．6</b></p&

78、gt;<p><b>　　7．834．5</b></p><p><b>　　7．932．0</b></p><p><b>　　8．029．2</b></p><p><b>　　8.126.2</b></p><p><b&

79、gt;　　8.222.9</b></p><p><b>　　8.319.9</b></p><p><b>　　8.417.2</b></p><p><b>　　8.514.7</b></p><p><b>　　8.612.4</b&

80、gt;</p><p><b>　　8.710.3</b></p><p><b>　　8.88.5</b></p><p><b>　　8.97.0</b></p><p>　　某一特定pH值的0.05mol/L Tris緩沖液的配制：將50ml 0.1mol/L Tr

81、is堿溶液與上表所示相應(yīng)體積（單位：ml）的0.1ml/L HCl混合，加水將體積調(diào)至100ml</p><p>　?。?）溫度對50mmol/L Tris?HCl液pH值的影響</p><p>　　4℃25℃37℃</p><p>　　8．17．57．2</p><p>　　8．27．67．3</p><p&

82、gt;　　8．37．77．4</p><p>　　8．47．87．5</p><p>　　8．57．97．6</p><p>　　8．68．07．7</p><p>　　8．78．17．8</p><p>　　8．88．27．9</p><p>　　8．98．38．0

83、</p><p>　　9．08．48．1</p><p>　　9．18．58．2</p><p>　　9．28．68．3</p><p>　　9．38．78．4</p><p>　　9．48．88．5</p><p>　　（6）常用緩沖液的pKa值</p>&l

84、t;p>　　緩沖液分子量pKa值緩沖范圍</p><p>　　Trisa12.18.087.1～7.9</p><p>　　HEPESb283.37.477.2～8.2</p><p>　　MPOSc209.37.156.6～7.8</p><p>　　PIPESd304.36.766.2～7.3</

85、p><p>　　MESe195.26.095.4～6.8</p><p>　　a：三羥甲基氨基甲烷；b：N-2-羥乙基哌嗪-N’-2-乙磷酸；c：3-（N-嗎啉代）丙磺酸；d：N，N’-雙（2-乙磺酸）哌嗪；e：2-（N-嗎啉代）乙磺酸。</p><p>　　7．溫度對常用緩沖液pH的影響</p><p>　　緩沖體系pKa(20℃)△

86、pKa/10℃</p><p>　　Mes6.15-0.110</p><p>　　Ada6.60-0.110</p><p>　　PiPes6.80-0.085</p><p>　　Aces6.90-0.200</p><p>　　Bes7.15-0.160</p><p>

87、;　　Mops7.20-0.013</p><p>　　Tes7.50-0.200</p><p>　　Hepes7.55-0.014</p><p>　　Tricine8.15-0.210</p><p>　　Tris8.30-0.310</p><p>　　Bicine8.35-0.180&

88、lt;/p><p>　　Glycylglycine8.40-0.280</p><p><b>　　三、常用酶的配制</b></p><p><b>　　1．溶菌酶</b></p><p>　　用水配制成50mg/ml的溶菌酶溶液，分裝成小份并保存于-20℃。每一小份一經(jīng)使用后便予丟棄。</p

89、><p><b>　　2．蛋白水解酶類</b></p><p>　　貯存液貯存溫度反應(yīng)濃度反應(yīng)緩沖液溫度預(yù)處理</p><p>　　0.01mol/L Tris(pH7.8)　</p><p>　　鏈霉蛋白酶a20mg/ml-20℃（溶于水）1mg/ml0.01mol/L EDTA37℃自消化b<

90、;/p><p>　　0.5% SDS　</p><p>　　0.01mol/L Tris(pH7.8)　</p><p>　　蛋白酶Kc20mg/ml-20℃（溶于水）50μg/ml0.005mol/L EDTA37～56℃無須預(yù)處理</p><p>　　0.5% SDS　</p><p>　　a：鏈霉蛋

91、白酶是從鏈球菌（Streptomyces griseus）中分離到的一種絲氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。</p><p>　　b：自消化可消除DNA酶和RNA酶的污染，經(jīng)自消化的鏈酶蛋白酶的配制方法如下：把該酶的粉末溶解于10mmol./l Tris?HCl(pH7.5)、10mmol/l NaCl中，配成20mg/ml濃度，于37℃溫育1h。經(jīng)消化的鏈霉蛋白酶分裝成小份放在密封試管中，保存-20℃。</p&

92、gt;<p>　　c：蛋白酶K是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶，從林伯氏白色念球菌（Tritirachium album Limber）中純化得到。該酶有兩個Ca2+結(jié)合位點，它們離酶的活性中心有一定距離，與催化機理并無直接關(guān)系。然而，如果從該酶中除去Ca2+，由于出現(xiàn)遠程的結(jié)構(gòu)變化，催化活性將喪失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情況下污染酸制品的蛋白質(zhì)。所以，蛋白酶K消化過程中通常加入EDTA（以抑制依賴于M

93、g2+的核酸酶的作用）。但是，如果要消化對蛋白酶K具有較強耐性的蛋白，如角蛋白一類，則可能需要使用含有1mmol/l Ca2+而不含EDTA的緩沖液。在消化完畢后、純化核酸前要加入EGT（pH8.0）至終濃度為2mmol/L,以鰲合Ca2+。</p><p>　　3．無DNA酶的RNA酶</p><p>　　將胰RNA酶（RNA酶A）溶于10mmol/l Tris?HCl(pH7.5)、1

94、5mmol/l NaCl中，配成10mg/ml的濃度，于100℃加熱15min，緩慢冷卻至室溫，分裝成小份保存于-20℃。</p><p><b>　　四、常用抗生素溶液</b></p><p>　　抗生素貯存液a工作濃度</p><p>　　濃度保存條件嚴緊型質(zhì)粒松弛型質(zhì)粒</p><p>　　氨芐青霉素5

95、0mg/ml(溶于水)-20℃20μg/ml60μg/ml</p><p>　　羧芐青霉素50mg/ml(溶于水)-20℃20μg/ml60μg/ml</p><p>　　氯霉素34mg/ml(溶于乙醇)-20℃25μg/ml170μg/ml</p><p>　　卡那霉素10mg/ml(溶于水)-20℃10μg/ml50μg/ml<

96、;/p><p>　　鏈霉素10mg/ml(溶于水)-20℃10μg/ml50μg/ml</p><p>　　四環(huán)素b5mg/ml(溶于乙醇)-20℃10μg/ml50μg/ml</p><p>　　a：以水為溶劑的抗生素貯存液通過0.22μm濾器過濾除菌。以乙醇為溶劑的抗生素溶液無須除菌處理。所有抗生素溶液均應(yīng)放于不透光的容器保存。</p>

97、<p>　　b：鎂離子是四環(huán)素的拮抗劑，四環(huán)素抗性菌的篩選應(yīng)使用不含鎂鹽的培養(yǎng)基（如LB培養(yǎng)基）。</p><p>　　五、常用貯存液的配制</p><p>　　1．30%丙烯酰胺溶液</p><p><b>　　【配制方法】</b></p><p>　　將29g丙烯酰胺和1g N，N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總

98、體積為60ml的水中。加熱至37℃溶解之，補加水至終體積為100ml。用Nalgene濾器（0.45μm孔徑）過濾除菌，查證該溶液的pH值應(yīng)不大于7.0，置棕色瓶中保存于室溫。</p><p><b>　　【注意】</b></p><p>　　丙烯酰胺具有很強的神經(jīng)毒性并可以通過皮膚吸收，其作用具累積性。稱量丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰胺時應(yīng)戴手套和面具。可認為聚丙烯酰胺無

99、毒，但也應(yīng)謹慎操作，因為它還可能會含有少量未聚合材料。</p><p>　　一些價格較低的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺通常含有一些金屬離子，在丙烯酰胺貯存液中加入大約0.2體積的單床混合樹脂（MB-1Mallinckrodt），攪拌過夜，然后用Whatman 1號濾紙過濾以純化之。</p><p>　　在貯存期間，丙烯酰胺和雙丙烯酰胺會緩慢轉(zhuǎn)化成丙烯酰和雙丙烯酸。</p><p

100、><b>　　2．40%丙烯酰胺</b></p><p><b>　　【配制方法】</b></p><p>　　把380g丙烯酰胺（DNA測序級）和20g N，N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為600ml的蒸餾水中。繼續(xù)按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法處理，但加熱溶解后應(yīng)以蒸餾水補足至終體積為1L。</p><p>

101、<b>　　【注意】</b></p><p>　　見上述配制30%丙烯酰胺的說明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列測定。</p><p><b>　　3．放線菌素D溶液</b></p><p><b>　　【配制方法】</b></p><p>　　把20mg放線菌素D溶解于4m

102、l 100%乙醇中，1：10稀釋貯存液，用100%乙醇作空白對照讀取OD440值。放線菌素D（分子量為1255）純品在水溶液中的摩爾消化系數(shù)為21，900，故而1mg/ml的放線菌素D溶液在440nm處的吸光值為0.182，放線菌素D的貯存液應(yīng)放在包有箔片的試管中，保存于-20℃。</p><p><b>　　【注意】</b></p><p>　　放線菌素D是致畸劑和

103、致癌劑，配制該溶液時必須戴手套并在通風櫥內(nèi)操作，而不能在開放在實驗桌面上進行，謹防吸入藥粉或讓其接觸到眼睛或皮膚。</p><p>　　藥廠提供的作治療用途的放線菌素D制品常含有糖或鹽等添加劑。只要通過測量貯存液在440nm波長處的光吸收確定放線菌素D的濃度，這類制品便可用于抑制自身引導(dǎo)作用。</p><p>　　4．0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液</p><

104、p><b>　　【配制方法】</b></p><p>　　在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH調(diào)至pH值至7.0，用蒸餾水定容1ml，分裝成小份保存于-70℃</p><p>　　5．10mol/L乙酸酰溶液</p><p><b>　　【配制方法】</b></p><

105、;p>　　把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后過濾除菌。</p><p>　　6．10%過硫酸銨溶液</p><p><b>　　【配制方法】</b></p><p>　　把1g過硫酸銨溶解于終量為10ml的水溶液中，該溶液可在4℃保存數(shù)周。</p><p><b>　　7．BCIP溶液

106、</b></p><p><b>　　【配制方法】</b></p><p>　　把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二鈉鹽（BCIP）溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃</p><p>　　8．2×BES緩沖鹽溶液</p><p><b>　　【配制方法】</b

107、></p><p>　　用總體積90ml的蒸餾水溶解1.07g鹽溶液BES[N，N-雙（2-羥乙基）-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4，室溫下用HCl調(diào)節(jié)　該溶液的pH值至6.96、然后加入蒸餾水定容至100ml，用0.22μm濾器過濾除菌，分裝成小份，保存于-20℃。</p><p>　　9．1mol/L CaCl2溶液</p>&l

108、t;p><b>　　【配制方法】</b></p><p>　　在200ml蒸餾水中溶解54g CaCl2?6H2O，用0.22μm濾器過濾除菌，分裝成10ml小份貯存于-20℃。</p><p><b>　　【注意】</b></p><p>　　制備感受態(tài)細胞時，取出一小份解凍并用蒸餾水稀釋至100ml，用Nalge

109、ne濾器（0.45μm孔徑）過濾除菌，然后驟冷至0℃。</p><p>　　10．2.5mol/L CaCl2溶液</p><p><b>　　【配制方法】</b></p><p>　　在20ml蒸餾水中溶解13.5g CaCl2?6H2O，用0.22μm濾器過濾除菌，分裝成1ml小份貯存于-20℃。</p><p>　

110、　11．1mol/L二硫蘇糖醇（DTT）溶液</p><p><b>　　【配制方法】</b></p><p>　　用20ml 0.01mol/L乙酸鈉溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT，過濾除菌后分裝成1ml小份貯存于-20℃。</p><p><b>　　【注意】</b></p><p>

111、　　DTT或含有DTT的溶液不能進行高壓處理。</p><p>　　12．脫氧核苷三磷酸（dNTP）溶液</p><p><b>　　【配制方法】</b></p><p>　　把每一種dNTP溶解于水至濃度各為100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/l Tris堿分別調(diào)節(jié)　每一dNTP溶液的pH值7.0（用pH試紙檢測），把中和

112、后的每種dNTP溶液各取一份作適當稀釋，在下表中給出的波長下讀取光密度計算出每種dNTP的實際濃度，然后用水稀釋成終濃度為50mmol/L的dNTP，分裝成小份貯存于-70℃。</p><p>　　堿基波長（nm）消化系數(shù)（ε）[L/（mol?cm）]</p><p>　　A2591.54×104</p><p>　　G2531.37×

113、;104</p><p>　　C2719.10×103</p><p>　　T2607.40×103</p><p>　　比色杯光徑為1cm時,吸光度=εM</p><p>　　13．0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液</p><p><b>　　【配制方法】</b

114、></p><p>　　在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-Na?2H2O），在磁力攪拌器上劇烈攪拌，用NaOH調(diào)節(jié)　溶液的pH值至8.0（約需20g NaOH顆粒）然后定容至1L，分裝后高壓滅菌備用。</p><p><b>　　【注意】</b></p><p>　　EDTA二鈉鹽需加入NaOH將溶液的pH值

115、調(diào)至接近8.0，才能完全溶解。</p><p>　　14．溴化乙錠（10mg/ml溶液）</p><p><b>　　【配制方法】</b></p><p>　　在100ml水中加入1g溴化乙錠，磁力攪拌數(shù)小時以確保其完全溶解，然后用鋁箔包裹容器或轉(zhuǎn)移至棕色瓶中，保存于室溫。</p><p><b>　　【注意】

116、</b></p><p>　　小心：溴化乙錠是強誘變劑并有中度毒性，使用含有這種染料的溶液時務(wù)必戴上手套，稱量染料時要戴面罩。</p><p>　　15．2×HEPES緩沖鹽溶液</p><p><b>　　【配制方法】</b></p><p>　　用總量為90ml的蒸餾水溶解1.6g NaCl、0

117、.074g KCl、0.027g Na2PO4?2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES，用0.5mol/l NaOH調(diào)節(jié)　pH值至7.05，再用蒸餾水定容至100ml。用0.22μm濾器過濾除菌，分裝成5ml小份，貯存于-20℃。</p><p><b>　　16．IPTG溶液</b></p><p><b>　　【配制方法】</b></

118、p><p>　　IPTG為異丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量為238.3），在8ml蒸餾水中溶解2g IPTG后，用蒸餾水定容至10ml，用0.22μm濾器過濾除菌，分裝成1ml小份貯存于-20℃。</p><p>　　17．1mol/L乙酸鎂溶液</p><p><b>　　【配制方法】</b></p><p>　　在8

119、00ml水中溶解214.46g四水乙酸鎂，用水定容至1L過濾除菌。</p><p>　　18．1mol/L MgCl2溶液</p><p><b>　　【配制方法】</b></p><p>　　在800ml水中溶解203.4g MgCl2?6H2O，用水定容至1L，分裝成小份并高壓滅菌備用。</p><p><b&

120、gt;　　【注意】</b></p><p>　　MgCl2極易潮解，應(yīng)選購小瓶（如100g）試劑，啟用新瓶后勿長期存放。</p><p>　　19．β-巰基乙醇（BME）溶液</p><p><b>　　【配制方法】</b></p><p>　　一般得到的是14.4mol/L溶液，應(yīng)裝在棕色瓶中保存于4℃。&

121、lt;/p><p><b>　　【注意】</b></p><p>　　BME或含有BME的溶液不能高壓處理。</p><p><b>　　20．NBT溶液</b></p><p><b>　　【配制方法】</b></p><p>　　把0.5g氯化氮藍四唑溶

122、解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃。</p><p><b>　　21．酚/氯仿溶液</b></p><p><b>　　【配制方法】</b></p><p>　　把酚和氯仿等體積混合后用0.1mol/L Tris?HCl(pH7.6)抽提幾次以平衡這一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆蓋等體積的0.01mol/

123、l Tris?HCl(pH7.6)液層，保存于4℃。</p><p><b>　　【注意】</b></p><p>　　酚腐蝕性很強，并可引起嚴重灼傷，操作時應(yīng)戴手套及防護鏡，穿防護服。所有操作均應(yīng)在化學通風櫥中進行。與酚接觸過的部位皮膚應(yīng)用大量的水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。</p><p>　　22．10mmol/L苯甲基磺酰氟（PM