地衣芽孢桿菌發(fā)酵豆粕的研究.pdf

1、地衣芽孢桿菌D-1是安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)飼料科技研究所分離的一株飼用微生物，為了實現(xiàn)地衣芽孢桿菌D-1的工業(yè)化生產(chǎn)，對該菌株的液態(tài)產(chǎn)堿性蛋白酶培養(yǎng)條件、工業(yè)培養(yǎng)基配方和固態(tài)發(fā)酵豆粕的發(fā)酵條件進行了優(yōu)化研究，并用該菌的固態(tài)發(fā)酵豆粕替代豆粕飼喂產(chǎn)蛋雞，比較其對蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)及血清生化指標(biāo)的影響。
　　 試驗1：地衣芽孢桿菌D-1 產(chǎn)堿性蛋白酶培養(yǎng)條件的優(yōu)化。為了對產(chǎn)堿性蛋白酶的地衣芽孢桿菌D-1的培養(yǎng)條件進行優(yōu)化，利用10L 發(fā)酵罐，

2、采用正交設(shè)計L9（3 4）
　　 試驗設(shè)計，對培養(yǎng)溫度，pH 值，攪拌轉(zhuǎn)速和通氣量 4 因素進行優(yōu)化，得到地衣芽孢桿菌D1發(fā)酵產(chǎn)堿性蛋白酶的最優(yōu)培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度37.0℃，pH 值7.5，通氣量4L/min，攪拌轉(zhuǎn)速300r/min。利用最優(yōu)條件組合進行驗證實驗表明，該培養(yǎng)條件下地衣芽孢桿菌D1堿性蛋白酶的酶活為91.26U/mL。
　　 試驗2：地衣芽孢桿菌D-1 培養(yǎng)基的優(yōu)化。為了優(yōu)化地衣芽孢桿菌D-1 菌株的培

3、養(yǎng)基成分，以培養(yǎng)基各組分對菌體生長的影響作為考察指標(biāo)，先采用單因素，確定最佳的碳源，氮源和無機鹽源，后采用正交設(shè)計L9 （3 3）試驗設(shè)計，對地衣芽孢桿菌D-1的培養(yǎng)基主要成分進行分析和優(yōu)化，得到地衣芽孢桿菌 D-1 優(yōu)化的最佳培養(yǎng)基配方為：以 2.5％麩皮作為碳源，以 2％豆粕粉作為氮源，以 0.06％ KH2PO4 作為無機鹽源，250mL 三角瓶裝液量 100mL，接種量 5％，培養(yǎng)溫度 37℃，初始 pH7.5，培養(yǎng) 24h，活

4、菌數(shù)最高，達到3.06×10 12 cfu/mL。
　　 試驗3：地衣芽孢桿菌D-1 發(fā)酵豆粕發(fā)酵條件的優(yōu)化。為了優(yōu)化地衣芽孢桿菌D-1發(fā)酵豆粕的發(fā)酵條件，以普通膨化豆粕為原料，采用 L16 （4 5）正交試驗設(shè)計，用 500mL三角瓶進行好氧固態(tài)發(fā)酵試驗，研究接種量、料水比、發(fā)酵時間、裝料量和發(fā)酵溫度5因素對發(fā)酵豆粕中酸溶蛋白含量、胰蛋白酶抑制因子、堿性蛋白酶酶活、中性蛋白酶酶活及脂肪酶酶活的影響。結(jié)果表明，以酸溶蛋白增加量為

5、目標(biāo)的最優(yōu)發(fā)酵條件為：
　　 接種量7％，料水比為1:1，發(fā)酵時間為58h，裝料量為60g，發(fā)酵溫度為39℃，發(fā)酵后酸溶蛋白含量（占風(fēng)干樣）為 23.46％；以胰蛋白酶抑制因子降解效果為目標(biāo)的最優(yōu)發(fā)酵條件為：接種量為 3％，料水比為 1:0.9，發(fā)酵時間為 48h，裝料量為 55g，發(fā)酵溫度為 33℃，發(fā)酵后胰蛋白酶抑制因子的含量為 4.28mg/g；以堿性蛋白酶酶活為目標(biāo)的最優(yōu)發(fā)酵條件為：接種量7％，料水比為1:0.7，發(fā)酵時

6、間為43h，裝料量為55g，發(fā)酵溫度為 33℃，發(fā)酵后堿性蛋白酶酶活達到 46.58U/g；以中性蛋白酶酶活為目標(biāo)的最優(yōu)發(fā)酵條件為：接種量 9％，料水比為 1:0.7，發(fā)酵時間為 58h，裝料量為 55g，發(fā)酵溫度為 35℃，發(fā)酵后中性蛋白酶酶活達到 31.58U/g；以脂肪酶酶活為目標(biāo)的最優(yōu)發(fā)酵條件為：接種量 9％，料水比為 1:0.7，發(fā)酵時間為 48h，裝料量為 55g，發(fā)酵溫度為33℃，發(fā)酵后脂肪酶酶活達到51.39mg/g。地

7、衣芽孢桿菌D-1 發(fā)酵豆粕不僅提高了酸溶蛋白的含量和消化酶的含量，而且能明顯降解抗?fàn)I養(yǎng)因子，從而改善豆粕的飼用品質(zhì)。
　　 試驗4：不同類型發(fā)酵豆粕飼喂產(chǎn)蛋雞的應(yīng)用研究。研究添加不同類型發(fā)酵豆粕對產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)及血液生化指標(biāo)的影響。試驗選取29周齡海蘭蛋雞324只，隨機分成3組，每組設(shè)3個重復(fù)，每個重復(fù)36只雞，分別飼喂基礎(chǔ)日糧（對照）、高酸溶蛋白發(fā)酵豆粕等比例替代基礎(chǔ)日糧中的2.5個百分點豆粕日糧（試驗1組）、低胰蛋白

8、酶抑制因子發(fā)酵豆粕等比例替代基礎(chǔ)日糧中的2.5個百分點豆粕日糧（試驗2組），試驗期42d。結(jié)果表明，與對照組相比，試驗1、2組產(chǎn)蛋率分別提高了3.08％和3.59％，差異均極顯著（P<0.01），破軟蛋率分別降低0.14％和0.25％，差異均顯著（P<0.05），試驗2組料蛋比降低了4.00％，差異顯著（P<0.05），但對蛋重和蛋品質(zhì)無顯著影響（P＞0.05）；試驗1、2組的IgA、IgM、IgG、堿性磷酸酶和總蛋白均有不同程度的提高