地衣芽孢桿菌Fosmid文庫構(gòu)建及絮凝基因探索.pdf

1、絮凝劑是一類可使液體中不易沉降的懸浮顆粒物聚集、沉降的物質(zhì)，在廢水處理、發(fā)酵工業(yè)、食品加工等行業(yè)廣泛應(yīng)用，可以分為無機(jī)絮凝劑和有機(jī)絮凝劑兩大類。其中，生物絮凝劑是一類由微生物產(chǎn)生的具有絮凝作用的高分子有機(jī)物，可生物降解，具有廣闊的應(yīng)用前景。
　　 以篩選到的一株具有高絮凝活性的地衣芽孢桿菌（Bacillus licheniformis）CGMCC2876為實(shí)驗(yàn)菌株，構(gòu)建Fosmid文庫，嘗試對該株細(xì)菌絮凝基因進(jìn)行探索。結(jié)果表明，

2、B.licheniformis CGMCC2876 Fosmid文庫構(gòu)建成功，共獲得1824個(gè)重組克隆，重組克隆可以穩(wěn)定遺傳，外源插入片段在25-40 kb之間。應(yīng)用兩步建池策略，構(gòu)建了超級池、初級池和二級池，以生物絮凝劑對高嶺土懸浮液的絮凝作用為標(biāo)準(zhǔn)，快速篩選具有絮凝活性的陽性克隆。最終得到4株陽性克隆，定位于第17號板池(Pool B，Pool4)(Pool D，Pool5)(Pool D，Pool7)(Pool G，Pool10)

3、。
　　 對其中的部分陽性克隆進(jìn)行全長測序并進(jìn)行序列分析。Softberry軟件及BLAST程序分析該插入片段約29 kb，含有24個(gè)推測的開放閱讀框。對推定基因編碼的產(chǎn)物進(jìn)行注釋，基因編碼的產(chǎn)物大部分為參與多糖類物質(zhì)合成的酶或蛋白，包括磷酸轉(zhuǎn)移酶、ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、糖苷水解酶、半乳糖通透酶、甘露糖轉(zhuǎn)移酶、糖基轉(zhuǎn)移酶家族蛋白、UDP-葡萄糖-4-差向異構(gòu)酶等催化生物反應(yīng)的一系列酶。同時(shí)獲得編碼未知功能蛋白的基因。蛋白亞細(xì)胞定位預(yù)測