豬鏈球菌流行病學特征和hp0197基因多態(tài)性研究.pdf

1、豬鏈球菌是一種革蘭氏陽性兼性厭氧型致病菌，臨床上可導致豬敗血癥，腦膜腦炎，關(guān)節(jié)炎，心內(nèi)膜炎等，是中國豬源鏈球菌病的主要病原，對我國的養(yǎng)豬業(yè)造成重大影響。2005年我國四川資陽爆發(fā)的人感染豬鏈球菌疫情導致數(shù)十人死亡造成了重大財產(chǎn)損失，對我國公共衛(wèi)生安全構(gòu)成重大威脅。本實驗室曾對2003-2007年分離的407株豬鏈球菌進行了流行病學分析，包括血清型、基因型和毒力因子基因檢測，并且對2003-2008年從臨床發(fā)病豬中分離的126株豬鏈球菌進

2、行了耐藥性檢測。從2007年之后，并沒有全國范圍的豬鏈球菌流行病學調(diào)查分析。本研究的主要內(nèi)容為2008-2012年豬鏈球菌的流行病學調(diào)查，包括血清型鑒定，耐藥性檢測，豬鏈球菌3型的基因型及致病力檢測;并分析了豬鏈球菌毒力因子基因與耐藥性的關(guān)系;另外，對本實驗室鑒定的毒力相關(guān)因子HP0197進行了基因多態(tài)性的檢測與分析。
　　 1.豬鏈球菌分離鑒定及耐藥性分析本研究對2008-2012年從發(fā)病豬中分離的豬鏈球菌進行了流行病學調(diào)查分

3、析，包括血清型，毒力因子基因檢測，17種抗生素的耐藥性檢測，結(jié)果顯示:2008-2012年共從8111份病料中分離豬鏈球菌1286株，分離率為15.9％。對其中351株進行了血清型鑒定，共分離到99株2型菌株，豬鏈球菌2型的分離率顯著高于其它血清型(P＜0.01)，表明2型依然是中國豬鏈球菌優(yōu)勢血清型。近4年（2009-2012年）分離的豬鏈球菌耐藥性檢測結(jié)果顯示:豬鏈球菌對四環(huán)素、紅霉素、阿奇霉素、克林霉素4種藥物的耐藥率均在89％以

4、上，其它藥物耐藥率均在20％以下，共發(fā)現(xiàn)22種耐藥譜。本研究還對27株豬鏈球菌的71種毒力因子基因進行了PCR檢測，發(fā)現(xiàn)多重耐藥（耐藥數(shù)大于4）豬鏈球菌毒力因子基因攜帶率顯著低于非多重耐藥（耐藥數(shù)小于等于4）菌株(P＜0.01)，從而證明豬鏈球菌的耐藥性與毒力因子基因分布存在負相關(guān)性。對試驗菌株進行MLST基因型檢測，發(fā)現(xiàn)多重耐藥菌株以不能分型分主，非多重耐藥菌株以ST1(ST7)為主。對試驗菌株進行血清型檢測，發(fā)現(xiàn)多重耐藥菌株以無法定

5、型為主，而非多重耐藥菌株以2型和3型為主，暗示多重耐藥菌株與非多重耐藥菌株在血清型和基因型上均存在明顯的差異。
　　 2.豬鏈球菌血清型和耐藥性流行趨勢分析對近5年（2008-2012年）分離的豬鏈球菌血清型分布情況與本實驗室2003-2007年血清型分布做比較分析，結(jié)果顯示:豬鏈球菌2型的分離率略有降低，豬鏈球菌3型的分離率升高。對近4年（2009-2012年）分離的豬鏈球菌耐藥性檢測數(shù)據(jù)與2003-2008年耐藥性數(shù)據(jù)比較分

6、析，結(jié)果顯示:豬鏈球菌的耐藥譜從11種增加到22種;耐藥譜為四環(huán)素、紅霉素、克林霉素和阿奇霉素4種抗生素的菌株從55.6％增加至69.4％，發(fā)現(xiàn)了耐受7、8、10和12種抗生素的耐藥譜;17種抗生素中紅霉素、阿奇霉素、克林霉素、氯頭孢菌素、頭孢吡肟、頭孢噻肟、頭孢呋辛的耐藥率均增加，表明豬鏈球菌耐藥性更加嚴重了。
　　 3.豬鏈球菌3型基因型及致病力檢測本研究對2008-2012年從發(fā)病豬中分離的66株豬鏈球菌3型菌株進行了基因

7、型和致病力檢測，共分離55株基因型為mrp+sly+ef-的菌株，占83.3％;分離6株基因型為mrp+sly+ef+的菌株，占9.1％;分離3株基因型為mrp-sly+ef-的菌株，占4.5％;分離2株基因型為mrp-sly-ef-的菌株，占3.0％。表明豬鏈球菌3型的主要基因型為mrp+sly+ef-。對6株基因型為mrp+sly+ef的3型菌株進行了小鼠毒力檢測，發(fā)現(xiàn)5株菌株對小鼠有明顯的致病力。并檢測到1株對小鼠高致病性的強毒3

8、型菌株。
　　 4.hp0197基因多態(tài)性分析對豬鏈球菌新發(fā)現(xiàn)的毒力相關(guān)因子HP0197做分子流行病學分析。分析了13個全基因組序列中的hp0197基因座位，并對56株不同血清型的菌株進行了PCR擴增，鑒定了其中36株存在hp0197基因，結(jié)果顯示:hp0197基因廣泛存在于1/2、1、2、3、4、5、7、8、9、11、14、17、18、19、23、25、29、33型和不能分型菌株中，并存在大量的基因多態(tài)性。17株豬鏈球菌2型均